[发明专利]一种人工光源视觉系统损伤的评价方法

摘要

本发明具体公开了一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，步骤包括将存储有人视网膜细胞的冻存管放入37℃的水浴中解冻10min，往其中加入DMEM高糖培养液，并置于培养箱中进行复苏培养，然后对复苏后的细胞进行传代培养，往第3代或第4代细胞的培养箱中置入人工光源，分别选取12h、18h和24h光照培养的传代细胞进行后续实验，最后以上述光照培养的传代细胞为材料提取RNA，并以mRNA为模板逆转录合成cDNA，再以cDNA为模板，对人视网膜细胞引起炎性因子设计特异引物进行荧光定量PCR，根据炎性因子的表达量判断人视网膜细胞的损伤情况，本发明可以检测各种人工光源对视觉系统的损伤情况，高效、灵敏。

主权项

1.一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、将存储有人视网膜细胞的冻存管迅速放入37℃的水浴中解冻10min；S2、将解冻后的人视网膜细胞转移到离心管中，以10000‑12000rpm的转速离心3‑5min，弃除上清；S3、往离心管中加入3‑5mLDMEM高糖培养液，轻轻混匀后接种于培养瓶中，然后置于培养箱中进行复苏培养，每两天更换一次培养液；S4、当细胞在培养瓶中长满90％以上后，将培养液弃除，往培养瓶中加入灭菌胎牛血清清洗3遍；S5、往培养瓶中加入2mL消化液，37℃消化30min；S6、往含消化液的培养瓶中加入2mL完全培养液，终止消化液的消化作用；S7、往清洗后的培养瓶中加入1.5mL 0.1％EDTA溶液，轻轻震荡将瓶底内的细胞溶解，使细胞完全脱落成细胞悬液；S8、将细胞悬液转移到离心管中，并置于离心机中以10000‑12000rpm的转速离心5min，弃除上清；S9、往离心管中加入适量DMEM高糖培养液，然后将其转移到多个新培养瓶中，并置于培养箱中培养；S10、按S4‑S9的方法进行传代培养，往第3代或第4代细胞的培养箱中置入人工光源，分别选取12h、18h和24h光照培养的传代细胞进行后续实验；S11、以上述光照培养的传代细胞为材料提取RNA，并以mRNA为模板逆转录合成cDNA，然后以cDNA为模板，对人视网膜细胞引起炎性因子设计特异引物进行荧光定量PCR，根据炎性因子的表达量判断人视网膜细胞的损伤情况。