[发明专利]脱氧胆酸钠沉淀法检测Hib结合疫苗中游离多糖的方法

摘要

本发明公开了一种脱氧胆酸钠沉淀法检测Hib结合疫苗中游离多糖的方法，属于疫苗检测技术领域，其技术方案要点是，包括供试品预处理、游离多糖溶液的收集、核糖浓度的测定以及计算供试品中多糖含量以及游离多糖的含量的操作步骤，其先利用超滤法去除蔗糖，再利用脱氧胆酸钠沉淀多糖蛋白结物，从而准确的对Hib结合疫苗中的游离多糖含量加以测定，降低了Hib结合疫苗的生产成本。

主权项

1.一种脱氧胆酸钠沉淀法检测Hib结合疫苗中游离多糖的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：一、供试品预处理：①结合原液预处理：取适量结合原液用灭菌注射用水按标示量稀释，即得结合原液的供试品溶液；②成品预处理：取适量成品用灭菌注射用水按标示量溶解，取4.0ml于超滤离心管中，在温度为4℃、转速为7000‑9000r/min的条件下超滤离心8‑12min，收集浓缩液，补灭菌注射用水至总体积为4ml，重复8‑10次上述在超滤离心后补灭菌注射用水的操作，吹打混匀后即得成品的供试品溶液；二、游离多糖溶液的收集：量取步骤一中的结合原液或成品的供试品溶液，加入脱氧胆酸钠溶液，充分混匀后冰浴20‑40min，再加入盐酸溶液，混匀后低温离心20‑40min，收集上清液为游离多糖溶液；三、核糖浓度的测定：使用化学法分别测定结合原液或成品的供试品溶液和游离多糖溶液中的核糖浓度，并将供试品溶液测得的核糖浓度记为C1，将游离多糖溶液测得的核糖浓度记为C2；四、计算结合原液或成品中的多糖含量以及游离多糖的含量：多糖含量(μg/ml)＝C1*n1/0.41其中，n1为供试品的稀释倍数；0.41为核糖含量和多糖含量的换算系数；游离多糖含量(％)＝(C2/C1)×n2×100％其中，n2为供试品溶液经脱氧胆酸钠处理过程中被稀释的倍数。