[发明专利]基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒，其包括DNA的提取部分和检测部分，反应体系中包含蛋白酶K等分子生物学试剂、十二烷基硫酸钠等普通化学试剂、2xTaq Plus Master Mix和各畜种所对应的特异性引物、ddH₂O等。该试剂盒对于牛肉、羊肉、猪肉、狗肉、马肉和驴肉的鉴别快速准确；除驴引物外，其他畜种引物的特异性均较强，不与其他物种发生交叉反应；灵敏性较高；在2.5h内就可以完成检测，快速省时且成本低，可同时对多个样品进行检测。本发明的试剂盒完全可用于熟肉制品的检测，为各食品检验机构提供了方法指导和技术支持，对于食品中畜源性成分的检测具有重要意义。

主权项

1.一种基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括DNA提取部分和检测部分，所述DNA提取部分的反应包括以下步骤：1)取100mg样品，放入2mL灭菌离心管中，加入500μL十二烷基硫酸钠裂解液和20μL蛋白酶K，混匀后在55℃条件下水浴至溶液透明，期间不时颠倒混匀离心管；2)加入等体积Tris饱和酚，颠倒混匀后12000r/min离心10min，将上清液转移到另一离心管，重复此步操作一次；3)随后在离心管中加入0.5倍体积的Tris饱和酚和0.5倍体积的24:1的氯仿/异戊醇，混匀后12000r/min离心10min，吸取上清至另一新离心管；4)加入0.1倍体积的乙酸钠溶液和2.5倍体积的4℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀后有白色沉淀析出，在‑20℃下沉淀2h；5)将溶液和絮状沉淀均加入放入收集管中的吸附柱中，12000r/min离心5min后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中；6)在吸附柱中加入70％乙醇500μL以洗涤沉淀，12000r/min离心5min弃废液，将吸附柱放入收集管中，重复上步操作；7)将吸附柱放入收集管中，12000r/min离心2min，弃废液，将吸附柱放在室温中晾干，彻底除去残余的乙醇；8)将吸附柱放入干净的离心管中，悬空滴加100μL洗脱液TE，室温放置5min后12000r/min离心2min，将溶液收集到离心管中；9)以TE做空白对照，用微量核酸、蛋白浓度测定仪测定所提取DNA的浓度及纯度，上样量均为1μL。