[发明专利]一种脐带间充质干细胞重层化培养的方法及其产物应用在审
| 申请号： | 201811024535.7 | 申请日： | 2018-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109321520A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 刘沐芸;刘云城;曾桂芳;梁晓;彭浩;陈康卓 | 申请（专利权）人： | 个体化细胞治疗技术国家地方联合工程实验室（深圳）;深圳科诺医学检验实验室 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;A61K8/99;A61K8/64;A61Q19/08;A61Q19/00;A61K35/28;A61P17/00 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人： | 卢霞 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区粤*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脐带间充质干细胞重层化培养的方法，包括以下步骤：a）分离、提取和培养健康人脐带间充质干细胞；b）通过无血清重层化培养基对脐带间充质干细胞进行重层化培养。利用脐带间充质干细胞重层化培养的方法产物制备生物活性膜的方法，所述的产物包括培养上清及重层化细胞层，培养上清通过特殊的低温真空冻干技术制成活性因子；重层化细胞层与洁净膜组合制成生物活性膜。还公开了生物活性膜在制备生物学活性功能的产品的应用。本发明的有益效果是：可以获得高水平的活性因子和重层化细胞层。并且此方法通过特殊的低温真空冻干技术，获得活性因子纯度、稳定性更高，通过重层化细胞层与洁净膜结合可以制成生物活性膜。 | ||
| 搜索关键词： | 重层 脐带间充质干细胞 生物活性膜 细胞层 活性因子 低温真空 洁净膜 冻干 人脐带间充质干细胞 生物学活性功能 产物应用 产物制备 培养基 无血清 制备 应用 健康 | ||
【主权项】：
1.一种脐带间充质干细胞重层化培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：a）分离、提取和培养健康人脐带间充质干细胞；b）通过无血清重层化培养基对脐带间充质干细胞进行重层化培养；所述的步骤b）中，无血清重层化培养基由以下成分组成：DMEM/F12、PDGF‑BB、 bFGF、TGF‑β1、EGF、转铁蛋白Transferrin和抗坏血酸；其中，PDGF‑BB含量为50～100 ng/mL；bFGF含量为0～50 ng/mL；TGF‑β1含量为0～20ng/mL；EGF含量为0～30 ng/mL；转铁蛋白Transferrin含量为2.0～4.5 mg/mL、抗坏血酸含量为10~100 ng/mL；所述的步骤b）中，重层化培养方法如下：将步骤a）中培养的融合度达到P2代脐带间充质干细胞更换成无血清重层化培养基进行培养，每隔2天换液，并收集上清，培养至第14~15天获取重层化培养细胞层。
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