[发明专利]一种猪凝血酶的制备方法在审

专利信息
申请号: 201811040796.8 申请日: 2018-09-07
公开(公告)号: CN109182315A 公开(公告)日: 2019-01-11
发明(设计)人: 刘骞 申请(专利权)人: 无锡凯夫制药有限公司
主分类号: C12N9/74 分类号: C12N9/74
代理公司: 连云港联创专利代理事务所(特殊普通合伙) 32330 代理人: 刘刚
地址: 214000 *** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种猪凝血酶的制备方法,包括以下步骤:1)血浆的制备、2)S/D法病毒灭活、3)凝血酶原粗品制备、4)凝血酶激活液制备、5)凝血酶纯化、6)超滤脱盐、7)纳米膜除病毒;本发明通过到工艺过程中的两步联合病毒灭活步骤,有效的控制了终产品中的病毒含量,提高了凝血酶的安全性;通过Marker电泳确认(图2),两步纯化明显提高了凝血酶的纯度,同时控制了S/D的残留,提高了纳滤膜除病毒的效率。
搜索关键词: 制备 凝血酶 病毒 种猪 凝血酶纯化 凝血酶激活 电泳 病毒灭活 工艺过程 两步纯化 凝血酶原 纳滤膜 纳米膜 超滤 粗品 脱盐 血浆 残留 联合
【主权项】:
1.一种猪凝血酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1)血浆的制备向收集的新鲜猪血中加入柠檬酸钠溶液,15℃以下,离心分离血红细胞和血浆,所得血浆置于‑20℃冻存;2)S/D法病毒灭活将经过室温解冻的血浆用定性滤纸过滤,所得滤液加入曲拉通X‑100和磷酸三丁酯,搅拌3~6小时;3)凝血酶原粗品制备将经过S/D灭活处理的血浆用定性滤纸过滤,所得滤液中加入DEAE Sephadex A‑50凝胶,搅拌;过滤,弃去滤液;配置0.01~0.1moL/L的柠檬酸钠、0.05~0.8moL/L氯化钠溶液的高盐洗涤液,先用高盐溶液淋洗凝胶除去杂蛋白;再用高盐溶液洗脱液浸泡凝胶10~20分钟,过滤,重复三次或三次以上,收集滤液;4)凝血酶激活液制备向上述滤液中加入氯化钙溶液,调整滤液中Ca+的浓度最终调节为0.02~0.15moL/L,25℃~32℃搅拌激活0.5小时;5)凝血酶纯化以Sp‑Sepharose FF填充的柱子,将上述凝血酶激活液按1:3~6的比例用柠檬酸钠溶液稀释,上样;上样完毕后用高盐洗涤液淋洗≥3个柱体积,洗涤杂蛋白;再用高盐洗涤液洗脱2个柱体积,收集凝血酶纯品;6)超滤脱盐将上述收集液进行超滤脱盐;7)纳米膜除病毒将DV20NI0552纳滤膜正确安装后,给储液罐中的超滤浓缩液加压,维持滤膜前后的压差在2~5bar,过滤超滤浓缩液,得到凝血酶溶液。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于无锡凯夫制药有限公司,未经无锡凯夫制药有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201811040796.8/,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code