[发明专利]以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用在审
| 申请号： | 201811060922.6 | 申请日： | 2018-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN109122665A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 徐峰波;崔光晶;金华;生德伟;王圣川;宋现收;王肇光 | 申请（专利权）人： | 银丰生物工程集团有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京金宏来专利代理事务所(特殊普通合伙) 11641 | 代理人： | 苗彩娟;许振强 |
| 地址： | 250000 山东省济南*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用，具体步骤包括：采用对脐带组织进行清洗之后剪成组织段、剥离间质华通氏胶组织；利用含有DMSO的α‑MEM保护剂预处理，置于4‑10℃进行浓度平衡10‑20分钟，后低温离心，去除上清液；加入右旋糖酐或胎牛血清与含有DMSO的α‑MEM保护剂共同构成冻存液，采用程控降温或分级降温的方式对组织进行冻存。本发明的冻存方法可有效保护冻存脐带组织，而且方便进行后续的复苏操作，且复苏后的组织培养出的细胞活性与新鲜组织中的细胞无差别。 | ||
| 搜索关键词： | 冻存 脐带组织 复苏 保护剂 干细胞 预处理 程控降温 低温离心 浓度平衡 胎牛血清 细胞活性 新鲜组织 右旋糖酐 组织培养 冻存液 上清液 保存 分级 间质 去除 应用 清洗 剥离 细胞 | ||
【主权项】：
1.以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法，其特征在于，以冻存脐带间质组织的形式保存脐带中相关的多种干细胞，冻存方法包括以下步骤：A.华通氏胶分离：使用生理盐水洗涤脐带2‑3次，用组织剪剪去脐带两头再涮洗2次，后用尖头直剪将脐带剪成2cm的小段，之后沿其静脉血管平行方向前开小口，再用组织镊纵向撕开、展平，将3根血管以及羊膜从脐带中剥离干净，剩余华通氏胶部分用生理盐水充分洗涤3次，转移至离心管中，剪至1‑2cm3的小块；B.进行预处理：离心管中加入含有DMSO的α‑MEM保护剂浸没全部组织块，置于4～10℃进行浓度平衡10～20分钟，后离心，去除上清液，放入冻存管中；C.组织冻存：向冻存管中加入右旋糖酐或胎牛血清，重悬华通氏胶小块，再加入含有DMSO的α‑MEM保护剂构成冻存保护剂，后进行组织降温冻存。
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