[发明专利]一种Slco1b2基因敲除大鼠的构建方法及应用在审
| 申请号： | 201811068044.2 | 申请日： | 2018-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN109295104A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 王昕;马新润;覃璇;尚旭阳;刘明耀 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;A01K67/027;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种Slco1b2基因敲除大鼠的构建方法，利用CRISPR/Cas9系统进行Slco1b2基因敲除大鼠的构建，包括Slco1b2敲除靶点的选择、sgRNA与Cas9mRNA的体外合成与转录、假孕母鼠的准备、单细胞胚胎的体外显微注射与移植、大鼠繁殖与筛选及得到纯合子Slco1b2基因敲除大鼠。经过T7EI核酸内切酶验证，通过本发明方法制备得到的基因敲除大鼠没有脱靶现象的产生，且在4周左右的F2代敲除大鼠中，总胆红素、直接胆红素和间接胆红素含量均显著性高于野生型大鼠。本发明还提出了将所述构建方法用于高胆红素血症疾病研究及药物研发中的应用。本发明为研究治疗胆红素升高等疾病研究提供了有效方法，为药物研发提供了有效实验工具，具有广泛应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 基因敲除大鼠 构建 大鼠 胆红素 疾病研究 药物研发 敲除 应用 高胆红素血症 单细胞胚胎 核酸内切酶 间接胆红素 直接胆红素 转录 假孕母鼠 实验工具 体外合成 显微注射 纯合子 显著性 野生型 靶点 体外 制备 升高 繁殖 验证 筛选 移植 治疗 研究 | ||
【主权项】：
1.一种Slco1b2基因敲除大鼠的构建方法，其特征在于，所述方法为利用CRISPR/Cas9系统构建Slco1b2基因敲除大鼠，所述方法包括以下步骤：1)Slco1b2敲除靶点的选择；2)sgRNA与Cas9 mRNA的体外合成与转录；3)将所述Slco1b2基因的sgRNA与Cas9 mRNA共注射到体外的受精卵胞浆中，移植至假孕母鼠中，获得F0代大鼠；4)对步骤3)获得的F0代大鼠进行基因型鉴定，筛选获得在Slco1b2敲除靶点附近发生非3整数倍缺失的F0代大鼠；5)将步骤4)筛选获得的F0代大鼠与野生型大鼠合笼，获得F1代大鼠；6)F1代大鼠之间交配，获得Slco1b2基因纯合敲除的F2代大鼠，构建得到Slco1b2基因敲除大鼠种群。
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