[发明专利]一种抗体纯化方法

摘要

本发明实施例提供了一种抗体纯化方法，用M1重组蛋白免疫的动物，对重组蛋白质反应度优于天然蛋白质，能够产生性能稳定、抗原效价高的单抗，采用CA‑AS法进行抗体纯化，抗体回收率、抗体活性、抗体纯度等方面存在较大优势，且此法操作简便，可重复使用，生产成本较低。

主权项

1.一种抗体纯化方法，其特征在于，包括：步骤一、在M1基因SEQ NO.2中插入表达载体pet32a，得到M1重组蛋白，以所述M1重组蛋白为抗原，免疫动物，再进行细胞融合和亚克隆；将上述亚克隆后的细胞扩大培养并注射至小鼠腹腔，7‑10日后抽取小鼠体内的腹水，将腹水在–20℃下保存；步骤二、将腹水置于4℃解冻过夜，取出后4℃条件下，10000×g离心10min，取上清，4℃保存；取腹水，用0.06mol/LpH4.4醋酸缓冲液稀释3倍，用1mol/L HCl调节pH至4.8；按每毫升稀释腹水加11μl辛酸的比例，室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，4℃静置2h；取出后，4℃条件下，15000×g离心30min，取上清，加入1/10体积的0.01mol/LPBS，用1mol/LNaOH调pH至7.2，在冰面操作加入饱和硫酸铵至45％饱和度，静置30min；取出后，10000×g离心30min，弃上清，将沉淀4℃保存；步骤三、将步骤二中的沉淀淀以0.01mol/L pH 7.2PB溶液A重溶，经Sepharose G‑25除盐后，过DEAE阴离子层析柱；以含0.5mol/L NaCl的0.01mol/L pH 7.2PB为洗脱液B，A、B液混合进行线性梯度洗脱，收集蛋白峰；提纯样品保存于–20℃环境中。