[发明专利]一种人非小细胞肺癌外周血髓源性抑制细胞的检测方法及其应用

摘要

本发明公开了一种人非小细胞肺癌外周血的髓源性抑制细胞的检测方法，采用非小细胞肺癌患者外周静脉血制备流式细胞仪检测的样本，利用流式细胞仪检测样本中髓源性抑制细胞比例，在检测过程中确定了MDSCs表面标记，明确了MDSCs不同亚群在非小细胞肺癌外周血中的表达比例。运用本发明检测方法，首先，评估非小细胞肺癌患者外周血中的免疫状态，进而预测其临床病情发展程度，为临床治疗方案的制定提供依据；其次，为非小细胞肺癌的免疫治疗提供一定的靶点，可以筛选抑制MDSCs功能的小分子抑制剂或中药复方。

主权项

1.一种人非小细胞肺癌外周血的髓源性抑制细胞的检测方法，其特征在于，包括如下步骤:(1)配置红细胞裂解液；(2)标记流式上样管：MDSC、空白、同型对照，并用移液器吸取100μl全血，加入上样管；(3)采用移液枪在每个上样管中加Fc封闭剂5μl，避光封闭5min；(4)在标记MDSC字样的上样管中加入5μl Human APC‑CD11b抗体、Human FITC‑CD14抗体、Human PE/Cy7‑CD15抗体和Human PE‑CD33抗体；空白管加入纯水；同型对照分别加入IgA/Iγ；避光孵育15min；(5)每支上样管加红细胞裂解液3ml，避光裂解10min；(6)至上样管内液体澄清透明后，用离心机离心5min，转速1500r/min；(7)弃上清，加入PBS重悬，重复上述步骤(6)离心2遍；(8)弃上清后，加300μl PBS重悬并在涡旋震荡仪上轻微震荡；(9)流式细胞仪上样检测；(10)MDSC检测的设门：根据空白管和同型对照，先圈定Gate1表示外周血单个核细胞PBMC,并设定细胞为10,000个；再设门根据CD14和CD11b的表达情况，圈定Gate2和Gate3分别表示细胞群CD14+CD11b+及CD14‑CD11b+；再根据CD33和CD15的表达情况，以及同型对照的分布趋势，再进一步圈定pmn‑MDSC与m‑MDSC。