[发明专利]AURKA-CKO1-N条件性基因敲除小鼠模型的构建方法有效
| 申请号： | 201811079721.0 | 申请日： | 2018-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN109197781B | 公开（公告）日： | 2021-04-06 |
| 发明（设计）人： | 杨晶;郑葵阳;汤仁仙 | 申请（专利权）人： | 徐州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 11471 | 代理人： | 韩国强 |
| 地址： | 221000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种AURKA‑CKO1‑N条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，通过先构建重组打靶载体，线性化后转染胚胎干细胞，筛选发生同源重组的胚胎干细胞克隆，扩增后注入供体小鼠囊胚生产出嵌合体小鼠；嵌合体小鼠与flp小鼠交配获得阳性F1代小鼠；阳性F1代小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠交配后，后代中获得具有AURKA‑CKO1‑N条件性基因敲除的小鼠模型。本发明所述的AURKA‑CKO1‑N条件性基因敲除小鼠模型，AURKA基因在特定组织和细胞类型中功能性缺失，为研究Aurora‑A在特定肿瘤发生发展中的作用机制提供理想模型。 | ||
| 搜索关键词： | aurka cko1 条件 基因 小鼠 模型 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种AURKA‑CKO1‑N条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建AURKA条件性基因敲除的重组打靶载体；(2)所述重组打靶载体经线性化后，转染胚胎干细胞；(3)筛选发生同源重组的胚胎干细胞克隆；(4)将筛选出的发生同源重组的阳性胚胎干细胞克隆经扩增后，注入供体小鼠的囊胚；(5)将含有阳性胚胎干细胞的囊胚移植到假孕小鼠的子宫，生产出嵌合体小鼠；(6)嵌合体小鼠与flp小鼠交配获得阳性F1代去Neo杂合子小鼠；(7)阳性F1代去Neo杂合子小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠交配后，获得双杂合的小鼠；(8)雌性与雄性双杂合小鼠互交，后代中获得具有AURKA‑CKO1‑N条件性基因敲除的小鼠模型。
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