[发明专利]一种适用于植物的Hi-C高通量测序建库方法在审
| 申请号： | 201811086366.X | 申请日： | 2018-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN109055491A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 冯欢 | 申请（专利权）人： | 武汉菲沙基因信息有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种适用于植物的Hi‑C高通量测序建库方法，包括：(1)样品冰上真空甲醛交联；(2)裂解交联后物料，释放染色质；染色质依次经SDS灭活内源酶、经MboI内切酶酶切打断获得酶切后物料；MboI内切酶的浓度为5000units/mL，酶切条件为：900rpm，37℃孵育过夜；(3)酶切后物料进行末端修复；(4)末端修复后DNA分子内连接；(5)解交联分子内连接后物料并去除未连接的末端生物素，获得纯化DNA，超声波随机打断DNA成利于测序的片段大小从而获得DNA测序文库。该方法通过设计合适的甲醛交联条件、内源酶灭活条件以及合适的工具酶，解决了植物细胞难释放细胞质、质量不好的植物样品建库效果差的技术问题，实现了植物的Hi‑C高通量测序建库，扩大了Hi‑C技术的适用范围。 | ||
| 搜索关键词： | 建库 酶切 高通量测序 甲醛交联 末端修复 内连接 内切酶 内源酶 染色质 灭活 打断 细胞质 测序文库 植物细胞 植物样品 释放 超声波 工具酶 解交联 生物素 未连接 测序 孵育 交联 裂解 去除 | ||
【主权项】：
1.一种适用于植物的Hi‑C高通量测序建库方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)对植物样品进行甲醛交联获得交联后的物料，所述甲醛交联步骤包括：将植物样品与预冷的交联体系混合后置于冰上真空孵育30‑40min进行甲醛交联，孵育结束后加入甘氨酸终止交联；(2)液氮研磨和裂解液并行裂解交联后物料，使裂解细胞释放细胞染色质并收集细胞染色质；细胞染色质依次经SDS灭活内源酶、经MboI核酸内切酶酶切打断获得酶切后物料；所述MboI核酸内切酶的浓度为5000units/mL，所述酶切反应条件为：900rpm，37℃孵育过夜；(3)用生物素标记的碱基对所述酶切后物料进行粘性末端补平，获得末端补平后DNA；(4)对所述末端补平后DNA进行DNA分子内连接获得分子内连接后物料；(5)解交联分子内连接后物料并去除未连接的末端生物素，获得纯化的DNA，超声波随机打断DNA成利于测序的片段大小从而获得DNA测序文库。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉菲沙基因信息有限公司，未经武汉菲沙基因信息有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811086366.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
