[发明专利]一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡

摘要

本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体检测卡及其制备方法。采用双抗原夹心法的原理，基于胶体金免疫层析技术而制成，该胶体金检测卡包括加样孔、观测窗、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫、PVC底板，在所述金标垫上结合有金标E蛋白和金标羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜上有一条含有鸭坦布苏病毒E蛋白的检测线（T线）和另一条含有鼠IgG的质控线（C线）。本发明用于检测鸭坦布苏病毒感染情况及鸭坦布苏病毒流行情况的监测，相比现有的检测方法，价格低廉，简便快捷，结果判断直观，灵敏准确，可有效避免钩状效应，同时保证假阳性被剔除而弱阳性不漏检，更便于现场检测。

主权项

1.一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体检测卡，包括外壳（1）和置于外壳内的试纸条（2），所述外壳（1）上开有观测窗（11）和加样孔（12）；所述试纸条（2）由样品垫（21）、金标垫（22）、硝酸纤维素膜（23）、吸收垫（24）顺次搭接粘贴在PVC底板（25）上构成，确保接头处有叠压，使层析能顺利进行；其中所述金标垫（22）上结合有金标E蛋白和金标羊抗鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上有一条含有鸭坦布苏病毒E蛋白的T线（26）和另一条含有鼠IgG的C线（27）；包括以下步骤：（1）金标羊鼠IgG的制备：将羊抗鼠IgG加入胶体金溶液中，用0.1mol/L的K2CO3溶液调节pH值至6.7；（2）金标E蛋白的制备：将E蛋白加入胶体金溶液中，用0.1mol/L的K2CO3溶液调节pH值至6.8；（3）硝酸纤维素膜的制备：用E蛋白和鼠IgG分别在层析膜上划线（0.9‑1.1mm）作为T线和C线，T线和C线间距约为7mm，冻干并4℃保存；（4）胶体金溶液的制备：在超纯水中加入1％氯金酸，加热煮沸，迅速加入1％柠檬酸三钠，继续煮沸15分钟，所述超纯水、氯金酸、柠檬酸三钠的体积比为99：1：1，冷却后用超纯水恢复至原来的体积，4℃保存备用；（5）金标垫的制备：免疫胶体金溶液均匀铺至金标垫，37℃作用2h，冻干并4℃保存；（6）组装检测卡：将吸水滤纸职称的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次贴到一张带不干胶的PVC底板上，组装成试纸条，然后将试纸条装入外壳，组装成检测卡。