[发明专利]一种基于多支杂交链式反应的核酸检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种基于多支杂交链式反应的核酸检测方法及应用，属于生物检测技术领域。所述检测方法包括：先将待测样本预处理成含有目标DNA的溶液，再往溶液中加入对应的三个发夹探针H1、H2、H3，目标DNA识别并打开H1，单向或双向引发H1和H2发生杂交链式反应，H2打开后其环序列引发打开H3形成多支杂交链式产物，通过打开的H3与界面的探针杂交将多支杂交链式产物多价捕获在界面，分析界面上的信号标记实现目标DNA的定量检测。本发明提供的检测方法中杂交链式反应在溶液中进行，显著提高杂交效率，再通过多价捕获的方式高效地将反应产物捕获到界面上，实现超灵敏核酸检测；设计的信号探针具有通用性，极大节约检测成本。

主权项

1.一种基于多支杂交链式反应的核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待测样本预处理得到含有目标DNA的溶液，所述目标DNA包含a序列；(2)合成发夹探针：根据目标DNA序列设计发夹探针H1、H2、H3，H1包括H1b、H1a’、H1c三个部分，其中H1b的部分序列与H1c的部分序列互补成双链作为H1发夹结构的茎部，H1a’为a序列的互补序列；H2包括H2b’、H2d、H2c’三个部分，其中H2b’的部分序列和H2c’的部分序列互补成双链作为H2发夹结构的茎部，H2b’与H1b互补，H2c’与H1c互补；H3包括H3e、H3f、H3e’、H3g四个部分，其中H3e与H3e’互补成双链作为H3发夹结构的茎部，H3f形成发夹结构的环部，H3g为H3的3’端单链粘性末端，H3e’和H3g与H2d互补；或者H1包括A和B两个部分，其中A的部分序列与B的部分序列互补成双链作为H1发夹结构的茎部，A为a序列的互补序列；H2包括A’、H2d和B’三个部分，其中A’的部分序列与B’的部分序列互补成双链作为H2发夹结构的茎部，A’与A互补，B’与B互补；H3的设计同上；所述H2或H3上修饰有信号标记；(3)基于多支杂交链式反应进行核酸检测：往含有目标DNA的溶液中加入H1、H2、H3，混合，室温下反应，形成多支杂交链反应产物，再将金界面上自组装有DNA探针的载体置于反应溶液中，所述DNA探针具有与H3中的H3f及H3e的部分序列互补配对的序列，DNA探针与H3杂交将多支杂交链反应产物捕获到金界面上；然后分析金界面上的信号标记变化测定溶液中目标DNA的含量，进而计算出待测样本中目标物的含量。