[发明专利]一种CD40联合PD-L1及细胞因子扩增PBMC的方法有效

专利信息
申请号: 201811107312.7 申请日: 2018-09-21
公开(公告)号: CN109251891B 公开(公告)日: 2021-10-22
发明(设计)人: 古彦铮;张学光;黄子逸;刘翠平 申请(专利权)人: 苏州大学附属第一医院
主分类号: C12N5/078 分类号: C12N5/078
代理公司: 北京知果之信知识产权代理有限公司 11541 代理人: 唐海力;韩来兵
地址: 215007 *** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种CD40联合PD‑L1及细胞因子扩增PBMC的方法,步骤如下:1)取正常人外周血,与PBS混合稀释后进行Ficoll密度梯度离心;2)离心结束后,得到4层液体;用移液管吸取中间云雾层细胞,用10倍体积的PBS洗涤离心,得到PBMC;3)将PBMC细胞用RMPI1640完全培养基配成细胞悬液,转入6孔板和24孔板里,然后于各组细胞培养液中加入相应细胞因子液:将孔板放到CO2培养箱内培养;4)视细胞状态每隔2~3天补加一次细胞因子液。本发明从CD40信号联合PD‑L1及细胞因子IL‑15和IL‑7组合扩增PBMC制备新型过继免疫治疗细胞为切入点,提供一种新的过继免疫细胞的体外诱导方案。此外,本发明所提供的方法实验设备要求低、操作简单省时、过继免疫细胞的收集率高、纯度高。
搜索关键词: 一种 cd40 联合 pd l1 细胞因子 扩增 pbmc 方法
【主权项】:
1.一种CD40联合PD‑L及细胞因子扩增PBMC的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)取正常人外周血,与PBS混合稀释后进行Ficoll密度梯度离心;2)离心结束后,得到4层液体;用移液管吸取中间云雾层细胞,然后用10倍体积的PBS洗涤离心,最后得到PBMC;3)将PBMC细胞用RMPI1640完全培养基配成细胞悬液,然后转入6孔板和24孔板里,然后于各组细胞培养液中加入相应细胞因子液:然后将孔板放到CO2培养箱内培养;4)视细胞状态每隔2~3天补加一次细胞因子液。
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