[发明专利]一种改进的重叠延伸PCR方法有效
| 申请号： | 201811128907.0 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109402109B | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 戴忠敏;郭伟;谢冰花;朱晓静;邱猛生 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;李世玉 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种改进的重叠延伸PCR方法，本发明通过添加引物，在重叠延伸PCR过程中能利用引物进行指数扩增，有效提高克隆效率和插入片段的长度，如实施例1所示，传统方法无法获得目的克隆，而本发明方法克隆数提高约10倍的同时阳性率为50％；能在载体同一位置同时插入多个片段；能在载体不同位置同时插入、删除及置换多个片段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 改进 重叠 延伸 pcr 方法 | ||
【主权项】：
1.一种改进的重叠延伸PCR方法，其特征在于所述方法为下列之一：(1)当克隆单个目的基因片段至载体时：以待克隆目的基因为模板，设计两端分别与目的基因和载体有14bp及以上重叠的引物进行第一轮PCR扩增，以第一轮PCR产物和载体为模板，以一端与目的基因有14bp及以上重叠、另一端与载体有14bp及以上重叠的引物进行第二轮PCR扩增，获得目的基因和载体的融合产物；(2)当克隆两个及以上目的基因片段到载体的一个位点时，分别根据各个目的基因设计引物，第一个目的基因和最后一个目的基因的各自一条引物两端分别与载体和目的基因有14bp及以上重叠，相邻两个目的基因的一条引物间有14bp及以上重叠；(3)当克隆两个及以上目的基因片段到载体的不同位点时，每个目的基因片段引物的两端均与载体有14bp及以上重叠区域。
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