[发明专利]一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法在审
| 申请号： | 201811148063.6 | 申请日： | 2018-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN109182265A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 卢刚;麻育源 | 申请（专利权）人： | 浙江省人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 张羽振 |
| 地址： | 310014 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法，使用电动钻锯将5cm3～15cm3颅骨骨片切碎至每片15～25立方毫米；加入20～30ml生理盐水，于低温摇床中慢摇，温度为4℃～10℃，转速为100～200转/分钟，摇10～15分钟；然后200～400目筛网过滤，收集滤液离心收集细胞；而后用细胞培养液悬浮细胞，所述的细胞培养液组成为含体积浓度1％～3％的血清替代物的MEM‑alpha基础培养液；接种至细胞培养瓶中，置于37℃，含5％CO2培养箱中培养；48小时后换液，除去未贴壁细胞。本发明的有益效果是：本发明所述方法从颅骨中快速高效分离得到具备典型特征的颅骨间充质干细胞，补充了间充质干细胞新的来源，有利于促进干细胞技术的研究和发展。 | ||
| 搜索关键词： | 颅骨 间充质干细胞 充质干细胞 细胞培养液 离心收集细胞 干细胞技术 基础培养液 未贴壁细胞 细胞培养瓶 血清替代物 研究和发展 典型特征 电动钻锯 高效分离 立方毫米 颅骨骨片 生理盐水 悬浮细胞 目筛网 换液 切碎 摇床 接种 过滤 补充 | ||
【主权项】：
1.一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：使用电动钻锯将5cm3～15cm3颅骨骨片切碎至每片15～25立方毫米；加入20～30ml生理盐水，于低温摇床中慢摇，温度为4℃～10℃，转速为100～200转/分钟，摇10～15分钟；然后200～400目筛网过滤，收集滤液离心收集细胞；而后用细胞培养液悬浮细胞，所述的细胞培养液组成为含体积浓度1％～3％的血清替代物的MEM‑alpha基础培养液；接种至细胞培养瓶中，置于37℃，含5％CO2培养箱中培养；48小时后换液，除去未贴壁细胞；而后每2～3天换新鲜的细胞培养液，长至80％～90％汇合时，消化传代，P3代细胞收集鉴定，即为纯化的颅骨间充质干细胞。
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