[发明专利]一种钴胺素生产菌种高效选育方法

摘要

本发明涉及菌种诱变技术领域，尤其是一种钴胺素生产菌种高效选育方法。该种种钴胺素生产菌种高效选育方法通过筛选合适的紫外线作用强度，使假单胞菌产生一定致死致畸的变异率，从而产生正向突变，继而通过特异抗生素的抗性筛选，定向维持紫外线诱变的正向突变，提高了菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，从而稳定得到生产性能较高的菌株，使发酵的工业化生产稳定高效，有效减少了因菌种退化造成的成本上升。

主权项

1.一种钴胺素生产菌种高效选育方法，其特征在于：包括以下步骤：培养斜面菌种：在无菌室内采用接种环蘸取冻存菌液的方法将钴胺素菌涂布于无菌斜面，然后将斜面置于生化培养箱，恒温培养，温度30±2℃；培养时间48‑56h，完成斜面种制备；诱变菌液制备：用生理盐水将步骤（1）中培养完成且生长成熟的斜面菌洗下，每个斜面用生理盐水1ml，将洗下的斜面菌加入盛有20ml生理盐水的100ml玻璃烧杯中，在无菌环境下，用磁力搅拌器搅拌2‑5min，制得诱变菌液；紫外诱变：将步骤（2）制得的诱变菌液置于超净台上，诱变菌液液面距离紫外灯23.5‑25cm，开启紫外灯，照射16‑20s，关闭紫外灯，用黑色塑料袋罩烧杯30‑40min，完成紫外诱变；抗性涂布：将步骤（3）中经过诱变的菌液进行梯度稀释，由10‑1分别稀释至10‑8，然后分别吸取10‑4、10‑5、10‑6、10‑7、10‑8的诱变的菌液涂布抗性平板，抗生素选用小诺霉素，平板抗生素浓度25‑35mg/L；平板培养及挑单菌：将步骤（4）制得的平板置于培养箱中培养32‑40h，然后挑取直径最大的菌落，涂斜面，置于培养箱中培养48‑55h，即得。