[发明专利]一种三步法序贯式诱导胎肝干细胞向成熟肝细胞分化的方法在审
| 申请号： | 201811173238.9 | 申请日： | 2018-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN109251884A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 刘卫辉;王涛;任丽娜;冯亚星 | 申请（专利权）人： | 刘卫辉 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 李永生 |
| 地址： | 610000 四川省*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种三步法序贯式诱导胎肝干细胞向成熟肝细胞分化的方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：(1)胎肝干细胞的获得与鉴定：a)胎肝干细胞的分离和扩增；b)胎肝干细胞的鉴定；(2)胎肝干细胞的诱导分化：a)在干冰上低温收集正常肝脏组织研磨匀浆后制成的组织悬液，离心后收集上清液加入Williams’E细胞培养基，并对步骤(1)中的胎肝干细胞进行培养以获得肝祖细胞；b)将步骤a)所获得的细胞用加入Notch信号通路抑制剂的Williams’E培养基，继续培养以获得肝样细胞；c)将步骤b)所获得的细胞用加入含HGF的细胞快速扩增培养基培养，以获得有功能的肝细胞，能快速、准确、高效地将我们前期获得的胎肝干细胞诱导分化为具有功能的肝细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 胎肝 干细胞 细胞 成熟肝细胞 肝细胞 三步法 序贯式 分化 诱导 生物技术领域 正常肝脏组织 干细胞诱导 扩增培养基 细胞培养基 低温收集 诱导分化 组织悬液 培养基 研磨 上清液 抑制剂 肝祖 扩增 匀浆 | ||
【主权项】：
1.一种三步法序贯式诱导胎肝干细胞向成熟肝细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)胎肝干细胞的获得与鉴定：1)胎肝干细胞的分离培养和扩增；2)胎肝干细胞的鉴定；(2)胎肝干细胞的诱导分化：a)在干冰上低温收集正常肝脏组织进行研磨匀浆，制作成组织悬液，离心后收集上清液，将上清液加入Williams’E细胞培养基，并对步骤(1)中的胎肝干细胞进行培养6‑8天；b)将步骤a)所获得的细胞用加入Notch信号通路抑制剂的Williams’E培养基，继续培养6‑8天；c)将步骤b)所获得的细胞用加入含有HGF因子的细胞快速扩增培养基，继续快速扩增6‑8天，以获得有功能的肝细胞。
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