[发明专利]一种水牛精原干细胞样细胞的体外培养及传代方法在审
| 申请号： | 201811197258.X | 申请日： | 2018-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN109402045A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 卢克焕;李婷婷;陆阳清;杨小淦;梁兴伟 | 申请（专利权）人： | 卢克焕;广西大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 北京君恒知识产权代理事务所(普通合伙) 11466 | 代理人： | 谭月萍;黄启行 |
| 地址： | 530004 广西壮族自治区南宁市西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开一种水牛精原干细胞样细胞的体外培养及传代方法，将原代水牛精原干细胞样细胞放入含有水牛支持细胞的培养皿上，培养60‑120h，完成体外培养；在体外培养得到的的水牛精原干细胞样细胞中加入PBS缓冲液，收集表层细胞，在该表层细胞中加入胰酶细胞消化液消化10‑60s，再加入IMDM培养液终止酶消化反应，收集表层细胞，将第二次收集的表层细胞移至铺有明胶的培养皿中，培养1.5‑4h，取上清细胞转移至含有水牛支持细胞的饲养层，完成传代培养；本发明的体外培养及传代方法操作简便，安全可靠，重复性高，对于哺乳类动物的不孕不育治疗以及濒临灭绝物种资源的保护具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 水牛 体外培养 精原干细胞 表层细胞 传代 细胞 培养皿 支持细胞 培养液 哺乳类动物 细胞消化液 不孕不育 传代培养 物种资源 细胞转移 重要意义 明胶 酶消化 饲养层 放入 胰酶 消化 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种水牛精原干细胞样细胞的体外培养及传代方法，其特征在于，所述的体外培养方法包括如下步骤：采用两步酶消化法对3‑7月龄水牛的睾丸组织进行消化后，使用移液器将消化液中团聚在一起的细胞吹成单个细胞，制成水牛睾丸单细胞悬液，再采用差异贴壁法处理水牛睾丸单细胞悬液，得到原代水牛精原干细胞样细胞；将原代水牛精原干细胞样细胞移至含有经丝裂霉素C处理过的水牛支持细胞的培养皿上，并加入干细胞培养液进行培养，每36‑60h更换一次干细胞培养液，培养60‑120h后，获得体外培养的水牛精原干细胞样细胞，完成体外培养。
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