[发明专利]一种壳斗科植物样品DNA提取和纯化方法在审
| 申请号： | 201811212185.7 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109136220A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 郑斯斯;李颖;李谦盛;邓敏;黄清俊 | 申请（专利权）人： | 上海应用技术大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 封喜彦;胡晶 |
| 地址： | 200235 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于壳斗科植物鲜样和标本的提取和纯化方法，本发明的提取方法在细胞核裂解之前，加入含有抗坏血酸、Triton‑X 100等的专用漂洗液，不仅能有效去除多糖多酚等杂质，使得到的DNA不再粘稠，还能有效去除色素污染，使所提取的DNA纯度高、产率大，相比核裂解之后再进行除杂的步骤顺序效果更优，适于后期分子实验的应用；本发明纯化方法采用硅胶粉自制硅胶吸附液，可有效纯化并获得高纯度DNA，能满足下游PCR及酶切实验。本发明方法克服了传统CTAB法和试剂盒在壳斗科植物提取中的困难，可用于提取壳斗科新鲜叶片、硅胶干燥样及保存年代较长的干燥植物标本样品的DNA，用于高通量测序。 | ||
| 搜索关键词： | 壳斗科植物 裂解 去除 细胞核 高通量测序 高纯度DNA 标本样品 步骤顺序 干燥植物 硅胶干燥 硅胶吸附 抗坏血酸 新鲜叶片 有效纯化 样品DNA 硅胶粉 壳斗科 漂洗液 试剂盒 粘稠 色素 产率 除杂 多酚 可用 鲜样 自制 保存 标本 污染 应用 | ||
【主权项】：
1.一种壳斗科植物样品DNA的提取和纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取植物样品，在研磨时加入交联聚乙烯基吡咯烷酮和/或维生素C，液氮快速研磨成粉；(2)加入专用漂洗液，震荡离心后弃上清，重复此步，直至上清无色且和沉淀物有明显的分界线；所述专用漂洗液主要包括如下有效组分：2％～4％PVP，1％～2％L‑Ascorbic Acid，2％～4％Triton‑X 100，4％～5％β‑mercatoeyhanol；(3)加入预热的CTAB提取液，60℃～65℃水浴40～60分钟，每5～10分钟颠倒混匀一次；(4)室温放置冷却2～3分钟后加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，震荡，离心；(5)取上清，加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)，震荡，离心；(6)取上清，加入1/10～1/5体积的3M～4M醋酸钠、双倍以上体积的‑20℃预冷的异丙醇，‑20℃静置30～50min，4℃离心；(7)去上清，用预冷的75％～80％酒精洗涤沉淀，无水乙醇加速脱水，管口倒置后，晾干，加入TE缓冲液溶解，即得植物基因组DNA；(8)取植物基因组DNA，通过硅胶粉吸附方法纯化，即得纯化后的植物总DNA。
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