[发明专利]一种预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法

摘要

本发明公开了一种预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法，所述方法是对中华人民共和国国家标准GB/T 22286‑2008、GB/T 21313‑2007中的提取步骤进了改进，在前处理提取步骤时加入乙酸铵缓冲盐溶液进行提取，步骤不变，在酶解进行的同时，加入C₁₈粉、硫酸锌，混匀，滴加几滴氢氧化钠溶液再离心，离心之后取其上清液。可以将大量蛋白胶体预防成冻或者带来大量蛋白沉淀，能够有效的解决在酶解步骤中，长时间37℃的加热后胶原蛋白就会变成水溶性的明胶，将其取出放凉后会凝结为冻，很难进行下一步净化甚至是过滤试验的问题。

主权项

1.一种预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法，其特征在于，所述方法应用在中华人民共和国国家标准GB/T 22286‑2008中，所述方法具体为：(1)称取5g经捣碎的样品于50ml离心管中，加入18mL 2mol/L的乙酸铵缓冲溶液，pH为5.2，充分混匀，再加50μLβ‑葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶以及1g C18粉、120g/L硫酸锌溶液2mL，滴加3‑5滴1mol/L氢氧化钠溶液，混匀后，37℃水浴振荡水解12h；(2)添加100μL 10nV/ml的内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器振荡15min，离心10min，取4ml上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，混合均匀，用高氯酸调节pH值到1±0.3，10000r/min冷冻离心10min后，将全部上清液转移到50ml离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11，加入10ml饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇‑乙酸乙酯混合溶液，充分提取，在10000r/min下冷冻离心10min。