[发明专利]一种提取橡胶树叶片总DNA的方法在审
| 申请号： | 201811230810.0 | 申请日： | 2018-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN109136221A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 黄关青;李冬青 | 申请（专利权）人： | 海南青峰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武汉智权专利代理事务所(特殊普通合伙) 42225 | 代理人： | 张凯 |
| 地址： | 570216 海南省海口市龙*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，涉及植物提取技术领域，在细胞核裂解前用提取缓冲液对样品进行预处理，使细胞质中的大部分多糖和多酚类物质溶解在提取缓冲液中，通过低速离心使之与含有总DNA的样品分离；提取缓冲液中用葡萄糖作稳定剂，以保持渗透性；提取缓冲液中用高浓度的聚乙烯吡咯烷酮结合多酚类物质；提取缓冲液中用高浓度巯基乙醇作抗氧化剂；裂解液中提供高浓度的氯化钠环境，使CTAB与DNA的复合物能充分溶解。 | ||
| 搜索关键词： | 提取缓冲液 总DNA 多酚类物质 橡胶树叶片 溶解 氯化钠 聚乙烯吡咯烷酮 细胞质 预处理 葡萄糖 细胞核 低速离心 抗氧化剂 样品分离 植物提取 巯基乙醇 复合物 裂解液 渗透性 稳定剂 裂解 | ||
【主权项】：
1.一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：取橡胶树叶片，放在液氮中研成粉末后转入离心管中，在离心管中加入预冷的提取缓冲液，低温离心；弃去上清液，沉淀中加入55～75℃预热的裂解液，于55～75℃水浴中保温；加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，于室温下离心；上清液转至另一新管中，加入异丙醇，于室温下离心；以乙醇洗沉淀，沉淀风干后，加入TE缓冲液，溶于微量离心管中，加入核糖核酸酶，于室温下保温；加入等体积的氯仿∶异戊醇混合液，低温离心；弃去上清液，加入醋酸钠，混匀后加入无水乙醇，翻转混匀，于‑15℃～‑25℃中静置；低温离心，用乙醇洗沉淀，沉淀风干后，将沉淀溶于TE缓冲液中，于‑15℃～‑25℃下保存。
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