[发明专利]一种高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法在审
| 申请号： | 201811259177.8 | 申请日： | 2018-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN109280637A | 公开（公告）日： | 2019-01-29 |
| 发明（设计）人： | 曹祖兵;高迪;许腾腾;童旭;张丹丹;王怡青;宁伟;齐昕;刘成雪;张运海 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法，包括以下步骤：配制以氯化钠作为溶质，TCM199作为溶剂配制成含有1wt％Nacl的液体，测量液体的渗透压，过滤，分装，加热至38.5℃备用；将卵泡液中的卵丘卵母细胞挑到盛有洗卵液的培养皿中，移入盛有400μL 1wt％Nacl液体的1.5mL离心管中，将离心管置涡旋振荡5分钟，再瞬时离心，转移到培养皿中；借助口吸管针将除去卵丘颗粒细胞的卵母细胞转移至TCM199操作液中，且快速清洗3遍，并置于盛有TCM199液滴中恢复5分钟，本发明通过1wt％Nacl处理去除猪未成熟卵母细胞外围卵丘细胞，具有省时、成本低、安全高效等优势。 | ||
| 搜索关键词： | 卵母细胞 卵丘细胞 未成熟 去除 培养皿 离心管 氯化钠 卵丘卵母细胞 测量液体 颗粒细胞 快速清洗 涡旋振荡 操作液 口吸管 卵泡液 渗透压 洗卵液 溶剂 分装 卵丘 溶质 省时 液滴 移入 加热 备用 过滤 配制 外围 恢复 安全 | ||
【主权项】：
1.一种高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)溶液的配制：:配制以氯化钠作为溶质，TCM199作为溶剂配制成含有1wt％Nacl的液体；配制液体前后分别测量液体的渗透压，再将所配制的液体进行过滤，分装到1.5mL离心管中，加热至38.5℃备用；(2)卵丘卵母细胞复合体去除外围卵丘细胞：将卵泡液中的卵丘卵母细胞挑到盛有洗卵液的培养皿中；利用口吸管针将上述挑选出的卵丘卵母细胞移入到提前预热好盛有400μL 1wt％Nacl液体的1.5mL离心管中，将含有卵丘卵母细胞的离心管置于涡旋振荡器中涡旋振荡5分钟，用离心机将离心管进行瞬时离心，然后将涡旋震荡后带有卵母细胞的液体转移到培养皿中；借助口吸管针将除去卵丘颗粒细胞的卵母细胞转移至TCM199操作液中，且快速清洗3遍，并置于盛有TCM199液滴中恢复5分钟，从而完成去除未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的收集。
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