[发明专利]一种小型猪胰岛细胞体外培养方法

摘要

本发明公开了一种小型猪胰岛细胞体外培养方法，该方法包括如下步骤：配置细胞生长液；配置细胞培养液；取出小型猪胰岛细胞冻存管，融化，放入装有细胞生长液的离心管中，离心处理，弃去上清液，采用细胞生长液将离心管底部的细胞悬浮起来，然后吸入装有细胞生长液的第一培养皿中，放入培养箱中进行培养；培养后，更换培养皿和培养基，采用装有细胞培养液的第二培养皿进行培养，以后每1‑3天更换一次培养皿和培养基，且均采用细胞培养液作为培养基。本发明能够降低细胞凋零率，提高胰岛β细胞活力，且所培养的细胞有敏感葡萄糖刺激应答，能够满足研究人类胰岛疾病的要求，具有重要的市场价值和社会价值。

主权项

1.一种小型猪胰岛细胞体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1）配置细胞生长液，所述细胞生长液包括小牛血清、F12培养基液和DMEM培养基液组成的第一基液，并在所述第一基液中加入细胞凋亡抑制剂Z‑VAD‑FMK、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、TGF‑β、胰岛素、青霉素、链霉素、转铁蛋白、第一添加剂；2）配置细胞培养液，所述细胞培养液包括小牛血清、F12培养基液和DMEM培养基液组成的第二基液，并在所述第二基液中加入细胞凋亡抑制剂Z‑VAD‑FMK、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、TGF‑β、胰岛素、青霉素、链霉素、转铁蛋白、第二添加剂；3）取出装有小型猪胰岛细胞的冻存管，融化后放入装有所述细胞生长液的离心管中，并采用所述细胞生长液将冻存管清洗，以把粘附在冻存管壁上的小型猪胰岛细胞洗下，再离心处理后弃去上清液，采用所述细胞生长液将离心管底部的细胞悬浮起来，然后吸入装有所述细胞生长液的第一培养皿中培养；4）更换培养皿和培养基，采用装有所述细胞培养液的第二培养皿进行培养；5）再次更换培养皿和培养基，采用装有所述细胞培养液的第三培养皿进行培养。