[发明专利]一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法在审
| 申请号： | 201811290297.4 | 申请日： | 2018-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN109439625A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 崔大祥;潘少君;张倩;章阿敏;黄志成 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 赵志远 |
| 地址： | 200030 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，包括以下步骤：(1)收集NK细胞培养基上清液，并用磷酸盐缓冲液进行稀释，得到稀释液；(2)将稀释液依次在低转速和高转速下离心，且每次离心后取上清液弃沉淀；(3)将离心上清液置于超滤管中进行离心，取上清液，得到的浓缩上清液进行超高速离心，超高速离心后取沉淀；(4)将步骤(3)超高速离心后得到的沉淀置于磷酸盐缓冲液中并转移至透析袋中进行透析，即得所述NK细胞exosomes。与现有技术相比，本发明粒径分布均匀，且表面携带标志性蛋白CD9、CD81、CD63，克服了现有制备技术存在纯度低，产量低，表征蛋白表达量低等不足，且可以直接用于后续的检测，安全系数高。 | ||
| 搜索关键词： | 超高速离心 制备 沉淀 磷酸盐缓冲液 取上清液 规模化 稀释液 可控 培养基上清液 标志性蛋白 蛋白表达量 离心上清液 浓缩上清液 安全系数 粒径分布 超滤管 低转速 高转速 透析袋 稀释 透析 并用 携带 检测 | ||
【主权项】：
1.一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集NK细胞培养基上清液，并用磷酸盐缓冲液进行稀释，得到稀释液；(2)将稀释液依次在低转速和高转速下离心，且每次离心后取上清液弃沉淀，在高转速下离心后得到离心上清液；(3)将离心上清液置于超滤管中进行离心，取上清液，得到的浓缩上清液进行超高速离心，超高速离心后取沉淀；(4)将步骤(3)超高速离心后得到的沉淀置于磷酸盐缓冲液中并转移至透析袋中进行透析，即得所述NK细胞exosomes。
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