[发明专利]一种人皮肤成纤维细胞提取方法及其培养基在审
| 申请号： | 201811304237.3 | 申请日： | 2018-11-03 |
| 公开（公告）号： | CN109294981A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 高戎戎;佟艳辉 | 申请（专利权）人： | 上海中溢精准医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 于晓菁 |
| 地址： | 200021 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人皮肤成纤维细胞提取方法，其包括步骤：1)将人的真皮组织剪碎并用含0.25％IV型胶原酶和0.1％胰蛋白酶的混合酶溶液消化至大组织块消失后终止消化；2)过滤消化后的真皮组织，收集滤液，离心，弃上清，收集沉淀的细胞并接种于培养瓶中，用筛选培养基培养；3)培养至细胞融合度达到70％后更换部分筛选培养基为扩增培养基，继续培养；4)培养至细胞融合度达到90％后，传代培养，并更换全部培养基为扩增培养基。其中，筛选培养基的配方为：DMEM高糖培养基作为基础培养基，其中含有体积含量为8‑12％的澳洲胎牛血清，以及0.4‑0.6ng/mL的EGF和4‑6ng/mL的bFGF作为添加因子；扩增培养基的配方为：DMEM高糖培养基作为基础培养基，其中含有体积含量为8‑12％的澳洲胎牛血清。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增培养基 筛选培养基 人皮肤成纤维细胞 基础培养基 胎牛血清 细胞融合 真皮组织 消化 胰蛋白酶 配方 混合酶溶液 传代培养 培养基 沉淀的 大组织 培养瓶 剪碎 接种 过滤 并用 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将人的真皮组织剪碎并用含0.25％IV型胶原酶和0.1％胰蛋白酶的混合酶溶液消化至大组织块消失后终止消化；2)过滤消化后的真皮组织，收集滤液，离心，弃上清，收集沉淀的细胞并接种于培养瓶中，用筛选培养基培养；3)培养至细胞融合度达到70％后更换部分筛选培养基为扩增培养基，继续培养；4)培养至细胞融合度达到90％后，传代培养，并更换全部培养基为扩增培养基。
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