[发明专利]一种仿生嵌入固定化酶-改性磷脂微囊的制备方法

摘要

本发明公开了一种仿生嵌入固定化酶‑改性磷脂微囊的制备方法，包括以下步骤：(1)改性磷脂的制备；(2)改性磷脂微粒的制备；(3)酶蛋白仿生嵌入改性磷脂微粒；(4)酶‑改性磷脂微囊的分离。本发明通过电磁‑超声耦合处理对磷脂进行改性，可改变其空间结构，有利于酶蛋白的嵌入，并且能提高嵌合的稳定性，利用培养基质液及制造脉冲生物电，模拟仿生环境，提高酶活力，从而提高酶蛋白嵌入成功率。利用本发明的方法制备的酶‑改性磷脂微囊作为药物载体，相较于普通纳米脂质载体，药物的溶解度可提高1.9‑2.1倍。

主权项

1.一种仿生嵌入固定化酶‑改性磷脂微囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)改性磷脂的制备S1：将磷脂溶解于去离子水中，配制成为浓度为3‑5％的磷脂溶液；S2：将所述磷脂溶液在惰性气体氛围保护下进行电磁‑超声耦合处理，得到改性磷脂溶液；(2)改性磷脂微粒的制备S1：向所述改性磷脂溶液中加入脱氧胆酸钠至终浓度为3％，水浴控温至25‑26℃；S2：在惰性气体氛围保护下进行超声波震荡分散，时间为10‑20min，温度控制在4‑10℃；S3：真空冷冻干燥后得到改性磷脂微粒；(3)酶蛋白仿生嵌入改性磷脂微粒S1：取浓度为3‑5mg/ml的酶蛋白溶液在1.5‑3.5kv/cm范围内，经工频电场处理5min，激活酶蛋白活力，再利用高速匀浆机匀浆处理2‑3次；S2：将改性磷脂微粒利用等体积比的磷酸缓冲液复溶，复溶液体再与2‑3倍体积比的培养基质液混合，调节pH至6.8‑7.3；S3：加入处理过的酶蛋白溶液，使得酶蛋白与磷脂的质量比为1:50‑60；S4：30℃恒温孵育40‑60min，期间利用石墨电极制造脉冲生物电，模拟仿生环境，并且分3次补充葡萄糖，葡萄糖添加总量为25mg/L；(4)酶‑改性磷脂微囊的分离S1：离心，弃上清，用10mM磷酸缓冲液对酶‑改性磷脂微囊充分洗涤，再将酶‑改性磷脂微囊重悬于100倍体积的10mM磷酸缓冲液中；S2：装入密封超滤膜，通入惰性气体，正压过滤16‑24h；S3：真空冷冻干燥得到酶‑改性磷脂微囊固体粉末。