[发明专利]一种双特异性抗体及其应用

摘要

本发明公开了一种双特异性抗体，通过将两种抗体的Fab结构域分别偶联第一连接臂和第二连接臂后，再通过两个连接臂之间的叠氮基接头与炔基接头发生叠氮‑炔基环加成反应，从而两种抗体的Fab偶联获得双特异性抗体。本发明双特异性抗体的制备方法较传统的双特异性抗体的制备方法有着表达水平高，偶联效率高，组装正确率高的优点，该形式的双特异性抗体具有更高的亲和性和特异性，在体内外均能有效激活淋巴细胞并产生对CD20阳性的肿瘤细胞的特异性杀伤，而且由于缺乏抗体的Fc段，不仅更易于穿透实体瘤，而且能够避免Fc造成的非特异性杀伤的毒副作用具有更高的特异性。

主权项

1.一种双特异性抗体，其特征在于，制备方法包括以下步骤：(1)分别提供抗CD20和抗CD3的单克隆抗体的Fab结构域，且两者Fab结构域的C端带有LPXTG序列，分别命名为Fab‑CD20和Fab‑CD3，(2)分别提供第一连接臂和第二连接臂，所述第一连接臂的两端分别具有寡甘氨酸接头和炔基接头，所述第二连接臂的两端分别具有寡甘氨酸接头和叠氮基接头，(3)在Sortase A酶催化下，LPXTG序列与寡甘氨酸接头发生转肽反应，使Fab‑CD20连接第一连接臂、Fab‑CD3连接第二连接臂，或者Fab‑CD20连接第二连接臂、Fab‑CD3连接第一连接臂，(4)所述叠氮基接头与炔基接头发生环加成反应，使第一连接臂与第二连接臂相连，从而将Fab‑CD20和Fab‑CD3相连，获得所述双特异性抗体。