[发明专利]一种水稻育种材料中抗稻瘟病基因Pi-25的检测方法在审
| 申请号： | 201811339926.8 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109402236A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 杨隆维;熊亚俊;王小文;华美;钟育海;刘迪权;郭发吉;覃竹山;徐建龙;徐俊英;谭小菊;程苏 | 申请（专利权）人： | 长江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;G16B5/00 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 434025*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于分子植物学领域，公开了一种水稻育种材料中抗稻瘟病基因Pi‑25的检测方法，所述检测方法：取新鲜水稻植株，在‑80℃进行冻干处理，研磨成细粉状，利用植物基因组DNA提取试剂盒提取水稻植株的DNA；引物：检测Pi25的引物对为CAP1F/R的引物序列，限制性内切酶为HincII；基因组DNA提取：用CTAB法提取水稻基因组DNA，1％的琼脂糖凝胶检测水稻基因组DNA；PCR扩增：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，73℃延伸30s，35个循环；73℃延伸3min；酶切：取15μL的利用CAP1引物PCR扩增产物，加入3μL酶切缓冲液，1.5μLHincⅡ限制性内切酶，补ddH2O 5μL至20μL体系，37℃对产物酶切位点进行酶切；电泳完成后，用凝胶成像系统对电泳胶进行照相。 | ||
| 搜索关键词： | 引物 水稻基因组DNA 抗稻瘟病基因 限制性内切酶 检测 水稻育种 水稻植株 酶切 琼脂糖凝胶检测 基因组DNA提取 植物基因组DNA 退火 凝胶成像系统 酶切缓冲液 提取试剂盒 电泳 酶切位点 引物序列 研磨 电泳胶 细粉状 预变性 延伸 变性 冻干 照相 新鲜 | ||
【主权项】：
1.一种水稻育种材料中抗稻瘟病基因Pi‑25的检测方法，其特征在于，所述水稻育种材料中抗稻瘟病基因Pi‑25的检测方法包括：步骤一：取新鲜水稻植株，在‑80℃进行冻干处理，研磨成细粉状，利用植物基因组DNA提取试剂盒提取水稻植株的DNA；步骤二：引物：检测Pi25的引物对为CAP1F/R的引物序列，限制性内切酶为HincII；步骤三：基因组DNA提取：用CTAB法提取水稻基因组DNA，1％的琼脂糖凝胶检测水稻基因组DNA；步骤四：PCR扩增：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，73℃延伸30s，35个循环；73℃延伸3min；步骤五：酶切：取15μL的利用CAP1引物PCR扩增产物，加入3μL酶切缓冲液，1.5μLHincⅡ限制性内切酶，补ddH2O 5μL至20μL体系，37℃对产物酶切位点进行酶切；步骤六：电泳完成后，用凝胶成像系统对电泳胶进行照相。
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