[发明专利]一种快速测试纳米颗粒对藻类活性影响的方法

摘要

本发明涉及一种能快速准确测试纳米颗粒作用下的藻细胞活性的方法。其步骤为：藻液的培养制备及实验溶液的配置；藻类生长抑制或灭活试验，试验期间每隔固定时间后将试验后的藻液100～400uL滴入消毒后的细胞培养板，并取平行样；向孔板藻液加入藻液体积1/10的细胞增殖试剂，在暗处孵育4～12h，使细胞贴壁；吸取上清液在450nm处用酶标仪或分光光度计检测吸光度(OD)值。该法通过可溶性甲瓒的吸光度测定细胞线粒体酶活性，可间接反映细胞增殖活性，避免纳米颗粒对计数的干扰，精度较高，可在藻类抑制及灭除测试中作为有效参考值。本方法可用于测试污废水、河水、各类循环水、培养液等各种水体中纳米颗粒对包括蓝藻门、绿藻门在内的大多数藻类的作用效果。

主权项

1.一种能快速准确测试纳米颗粒作用下的藻细胞活性的方法，其特征在于包括的步骤如下：(1)藻类的培养及生长抑制测试参考标准ISO1442:1999和BS EN ISO8692：2004；(2)将培养至对数期并经饥饿处理24h的藻类加入水体中，保证生长抑制实验保证藻细胞密度不低于104cell/ml；去除实验保证藻细胞密度不低于106cell/ml；(3)设定光源为自然光、LED可见光，紫外光，生长抑制实验中可见光光照强度维持在液面处2000～10000Lux；去除实验中如需光照可设定紫外光辐照1～10mW/cm2，可见光强度为2～15mW/cm2，光照时间根据实验要求决定，若为异养生长则可减少周期光照时间，自养生长需保证每个周期12h以上的光照时间，去除实验光照时间在0～24h；实验温度设置在25～35℃之间；(4)生长抑制实验取样间隔为24h，藻类去除实验取样间隔为1‑6h；将取样后的藻液更换新的培养基，每次取100‑400uL加入到孔板中，每组设置至少6个平行样，并加入1/10体积的细胞增殖试剂；在25～35℃下孵育4‑12h，若光照会产生还原性物质，需在黑暗条件下孵育；(5)孵育完毕后，取上清液在酶标仪或分光光度计下读数，波长选择为450nm，并用公式计算抑制率，生长抑制实验的理论抑制率为正，去除实验的理论抑制率为负。