[发明专利]一种提高烟叶提取物中萜类代谢酶酶活的提取方法在审
| 申请号： | 201811346922.2 | 申请日： | 2018-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN109321537A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 翟妞;张慧;陈千思;周会娜;刘萍萍;徐国云;郑庆霞;许亚龙;李晶;王晨;金立锋 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04 |
| 代理公司： | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 时立新 |
| 地址： | 450001 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本申请属于烟草代谢物技术领域，具体涉及一种提高烟叶提取物中萜类代谢酶酶活专利申请事宜。该方法针对针对新鲜烟叶中萜类代谢酶的提取，具体包括：制备提取液（采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS）、烟叶预处理、溶液法提取等步骤。初步测定结果表明，提取液中DXR酶活得到了较好提高，可达3.5×10‑4U/μg全蛋白，而HMGR酶活可达6.7×10‑4U/μg全蛋白，较好达到了减少杂质蛋白干扰、提升DXR酶和HMGR酶含量的目的。同时由于相关提取方法简单快速、耗时较短（仅1.5 h左右），因此使得本申请具有较好的科研价值，可为DXR和HMGR活性分析及其它相关蛋白分析和研究奠定技术基础。 | ||
| 搜索关键词： | 代谢酶 酶活 萜类 烟叶提取物 全蛋白 提取液 申请 烟叶预处理 蛋白分析 活性分析 技术基础 新鲜烟叶 杂质蛋白 代谢物 缓冲液 裂解液 溶液法 制备 耗时 烟草 科研 研究 | ||
【主权项】：
1.一种提高烟叶提取物中萜类代谢酶酶活的提取方法，其特征在于，该方法针对新鲜烟叶中萜类代谢酶的提取，具体包括如下步骤：（1）制备提取液，具体采用裂解液RIPA 、NEB或PBS；配方组成为：裂解液RIPA ：pH 8.0的Tris‑Cl、50 mM，EDTA、1mM，SDS、0.1%，NaCl、150 mM，NP‑40、1%，PMSF、1 mM；缓冲液NEB： pH 7.5的Hepes、20mM，KCl、40 mM，EDTA、1 mM，NP‑40、1%，PMSF、1 mM；（2）烟叶预处理将烟草8‑12叶期的新鲜烟叶，研磨成粉备用；（3）溶液法提取在步骤（2）研磨成粉烟叶样品中加入步骤（1）中制备的提取液，震荡混匀后，冰上静置不少于1h；具体用量方面，研磨成粉烟叶样品100mg，提取液用量为500μl‑1mL；静置完成后，5000~15000rpm离心不少于20min，保留上清液，即为含有萜类代谢酶的提取液。
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