[发明专利]一种提高烟叶提取物中萜类代谢酶酶活的提取方法在审

专利信息
申请号: 201811346922.2 申请日: 2018-11-13
公开(公告)号: CN109321537A 公开(公告)日: 2019-02-12
发明(设计)人: 翟妞;张慧;陈千思;周会娜;刘萍萍;徐国云;郑庆霞;许亚龙;李晶;王晨;金立锋 申请(专利权)人: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
主分类号: C12N9/04 分类号: C12N9/04
代理公司: 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 代理人: 时立新
地址: 450001 *** 国省代码: 河南;41
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摘要: 本申请属于烟草代谢物技术领域,具体涉及一种提高烟叶提取物中萜类代谢酶酶活专利申请事宜。该方法针对针对新鲜烟叶中萜类代谢酶的提取,具体包括:制备提取液(采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS)、烟叶预处理、溶液法提取等步骤。初步测定结果表明,提取液中DXR酶活得到了较好提高,可达3.5×10‑4U/μg全蛋白,而HMGR酶活可达6.7×10‑4U/μg全蛋白,较好达到了减少杂质蛋白干扰、提升DXR酶和HMGR酶含量的目的。同时由于相关提取方法简单快速、耗时较短(仅1.5 h左右),因此使得本申请具有较好的科研价值,可为DXR和HMGR活性分析及其它相关蛋白分析和研究奠定技术基础。
搜索关键词: 代谢酶 酶活 萜类 烟叶提取物 全蛋白 提取液 申请 烟叶预处理 蛋白分析 活性分析 技术基础 新鲜烟叶 杂质蛋白 代谢物 缓冲液 裂解液 溶液法 制备 耗时 烟草 科研 研究
【主权项】:
1.一种提高烟叶提取物中萜类代谢酶酶活的提取方法,其特征在于,该方法针对新鲜烟叶中萜类代谢酶的提取,具体包括如下步骤:(1)制备提取液,具体采用裂解液RIPA 、NEB或PBS;配方组成为:裂解液RIPA :pH 8.0的Tris‑Cl、50 mM,EDTA、1mM,SDS、0.1%,NaCl、150 mM,NP‑40、1%,PMSF、1 mM;缓冲液NEB: pH 7.5的Hepes、20mM,KCl、40 mM,EDTA、1 mM,NP‑40、1%,PMSF、1 mM;(2)烟叶预处理将烟草8‑12叶期的新鲜烟叶,研磨成粉备用;(3)溶液法提取在步骤(2)研磨成粉烟叶样品中加入步骤(1)中制备的提取液,震荡混匀后,冰上静置不少于1h;具体用量方面,研磨成粉烟叶样品100mg,提取液用量为500μl‑1mL;静置完成后,5000~15000rpm离心不少于20min,保留上清液,即为含有萜类代谢酶的提取液。
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