[发明专利]一种选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法

摘要

本发明公开了一种选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，该方法包含：(1)以携带光温敏核不育基因的水稻为受体，以含有Cry1C基因和bar基因的可育水稻为供体，获得BC₁F₁种子；(2)喷施除草剂筛选阳性单株，种植；(3)提取单株水稻的基因组DNA，检测光温敏感育性基因，并将阳性单株与受体不育株材料回交得BC2F1种子；(4)重复步骤(2)～(3)，获得BC₃F₁，自交得BC₃F₂；(5)将BC₃F₂播种，幼穗分化期低温处理；(6)抽穗后观察花育性和单穗结实，无花粉单株割兜再抽穗；(7)对再生穗进行低温处理，自交得BC₃F₃；(8)将BC₃F₃，重复步骤(5)～(7)，得BC₃F₄；(9)育成新的抗虫两系不育系水稻。本发明的方法在4年内完成两系不育系选育，提高了工作效率。

主权项

1.一种选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，该方法包含：(1)以携带光温敏核不育基因的非转BT基因水稻材料为受体材料，以含有Cry1C基因和抗除草剂bar基因的可育水稻材料为供体材料，将两者杂交得到F1代种子，种植F1代种子，以F1代为父本与亲本中的携带光温敏核不育基因的水稻材料回交，收获BC1F1回交世代杂交种子；(2)将受体材料和BC1F1回交世代种植，通过对回交世代材料喷施草甘膦铵盐筛选携带Cry1C基因的植株，阳性单株为携带Cry1C基因的植株；(3)取所述阳性单株的叶片，提取基因组DNA，使用光温敏核不育基因的SSR分子标记引物进行育性基因的PCR检测，选择引物标记为杂合信号，且株叶形态接近受体材料的单株，至抽穗时，对比受体材料的生长情况，选取BC1F1中最接近受体材料的单株，与受体材料单株继续回交，收获BC2F1种子；(4)重复步骤(2)～(3)，至获得BC3F1回交世代杂交种子，种植BC3F1回交世代，苗期同步骤(2)的草甘膦铵盐筛选和PCR检测，选择育性基因纯合的单株自交，收获农艺性状接近轮回亲本的自交种子，得到BC3F2种子；(5)将BC3F2种子浸种、催芽、播种，苗期同步骤(2)的草甘膦铵盐筛选获得阳性单株，置于适温28～32℃条件下，进行水肥管理，群体单株农艺性状接近受体材料的农艺性状，当群体植株开始进入育性敏感期时，采用冷水鉴定温度为22.5～23.5℃的冷水进行低温处理，待冷水低温处理结束，在适温生长；(6)抽穗时开始观察筛选：保留没有明显花粉产生的单株，并取其穗支梗进行花粉育性检测，并割兜留桩，适温环境待再生穗抽穗；(7)在再生幼穗将进入育性敏感期时，采用繁殖温度为19～21℃的冷水进行低温处理，待冷水低温处理结束，再转移到适温无风环境生长，防止花粉飘散，待抽穗自交结实，收获BC3F3种子；(8)将BC3F3种子，重复步骤(5)～(7)，收获BC3F4种子，作为原种保存，BC3F4种子的光温敏核不育基因已经纯合，育性起点温度稳定；(9)种植BC3F4种子，进行原种繁殖，育成新的抗虫两系不育系水稻，该抗虫两系不育系水稻还具有抗除草剂性能。