[发明专利]一种用于检测中华乌塘鳢Mn-SOD基因的引物和实时荧光定量PCR方法有效
| 申请号： | 201811356395.3 | 申请日： | 2018-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN109423511B | 公开（公告）日： | 2021-09-17 |
| 发明（设计）人： | 沈斌;魏可;卢德政;巩壮 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 316100 浙江省舟山市普陀区普*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及荧光定量PCR检测方法技术领域，特别涉及一种用于检测中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis)Mn‑SOD基因的引物及实时荧光定量PCR法，该方法利用实时荧光定量PCR技术分析中华乌塘鳢不同组织的Mn‑SOD基因表达量，以GAPDH为内参基因，设计内参基因引物和目的基因引物；以逆转录的cDNA为模板，在ABI 7500 Fast Real‑time PCR system上对目的基因的表达水平进行检测，对检测结果进行统计分析，能快速、准确的检出Mn‑SOD基因在中华乌塘鳢不同组织中的表达与分布情况，为该基因的利用和研究提供科学依据。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 中华 乌塘鳢 mn sod 基因 引物 实时 荧光 定量 pcr 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于检测中华乌塘鳢Mn‑SOD的实时荧光定量PCR方法，其特征在于，所述PCR方法包括以下步骤：1)中华乌塘鳢目的基因Mn‑SOD的实时荧光定量引物设计：利用如SEQ ID NO.1所示中华乌塘鳢Mn‑SOD基因的开放阅读框序列，设计引物；2)中华乌塘鳢内参基因GAPDH的实时荧光定量引物设计：利用如SEQ ID NO.2所示中华乌塘鳢GAPDH基因的开放阅读框序列，设计引物；3)中华乌塘鳢不同组织cDNA逆转录：提取健康成年中华乌塘鳢不同组织的总RNA，并将提取的不同组织的总RNA分别逆转录成cDNA，0℃以下保存备用；4)中华乌塘鳢Mn‑SOD基因的实时荧光定量PCR检测：以逆转录的cDNA为模板，以GAPDH为内参基因，在ABI 7500 Fast Real‑time PCR system上对中华乌塘鳢Mn‑SOD基因的表达水平进行检测，分析Mn‑SOD基因在中华乌塘鳢不同组织中的表达与分布情况。
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