[发明专利]一种提高CAR-T细胞转染效率的方法在审
| 申请号： | 201811363377.8 | 申请日： | 2018-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN109439632A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 胡宗涛;吕东来;王宏志 | 申请（专利权）人： | 中国科学院合肥肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 230031 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明属于肿瘤治疗技术领域，公开了一种提高CAR‑T细胞转染效率的方法。构建CAR质粒，保证质粒浓度在1500ng/ul以上；CAR质粒构建完成后，进行CAR脂质体构建；利用CAR质粒对慢病毒进行包装，48小时后收病毒；利用PBS对血液进行稀释，成分混匀，对PBMC细胞进行提取；在T细胞激活过程中进行感染，提取后PBMC加入CD3抗体包被的24孔板中过夜进行T细胞激活，而后进行电转、脂质体转染和慢病毒感染，6h后换液为正常培养基。本发明相比于电转、脂质体转染，慢病毒感染对T细胞而言有更高的效率；在T细胞激活过程中进行感染比激活前/激活后进行感染，CAR阳性感染的T细胞增多。 | ||
| 搜索关键词： | 质粒 感染 慢病毒感染 脂质体转染 电转 构建 激活 正常培养基 细胞转染 质粒构建 肿瘤治疗 转染效率 慢病毒 脂质体 包被 换液 混匀 孔板 稀释 病毒 血液 保证 | ||
【主权项】：
1.一种提高CAR‑T细胞转染效率的方法，其特征在于，所述的提高CAR‑T细胞转染效率的方法，具体包括以下步骤：步骤一：构建CAR质粒，保证质粒浓度在1500ng/ul以上；步骤二：CAR质粒构建完成后，进行CAR脂质体构建；步骤三：利用CAR质粒对慢病毒进行包装，48小时后收病毒；步骤四：利用PBS对血液进行稀释，成分混匀，对PBMC细胞进行提取；步骤五：在T细胞激活过程中进行感染，提取后PBMC加入CD3抗体包被的24孔板中过夜进行T细胞激活，而后进行电转、脂质体转染和慢病毒感染，6h后换液为正常培养基。
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