[发明专利]一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法

摘要

本发明公开了一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法。本发明的诱导方法以黄花倒水莲优树未萌发种子作为外植体，获得最适宜的种子萌发培养和无菌苗增殖培养的培养基配方，筛选出了适宜无菌苗茎段和叶片愈伤组织诱导的培养基配方，为黄花倒水莲植物资源的替代来源研究及细胞悬浮培养获取有效次生代谢成分提供了科学依据，为后续的产业化开发研究奠定了基础。

主权项

1.一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外植体选择：以黄花倒水莲优树未萌发种子作为外植体，对该外植体进行清洗和消毒；(2)萌发培养：将步骤(1)清洗和消毒过后的外植体置于萌发培养基中，于黑暗条件下25±2℃进行萌发培养29‑32d，获得无菌苗，该萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24‑26g/L，琼脂6.8‑7.2g/L，6‑BA 0.95‑1.05mg/L，NAA 0.48‑0.51mg/L，pH＝5.75‑5.86；(3)增殖培养：切取步骤(1)获得的无菌苗的长为1～2cm的带节茎段，置于增殖培养基中进行增殖培养29‑32d，以诱导无菌苗上形成更多的丛生芽，该增殖培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24‑26g/L，琼脂6.8‑7.2g/L，6‑BA 0.95‑1.05mg/L，NAA 0.19‑0.21mg/L，pH＝5.75‑5.86；上述增殖培养的条件为：光照强度为1200‑2000LuX，光照时间12‑16h/d，温度为25±2℃；(4)茎段愈伤组织诱导培养：将经步骤(3)增殖培养的无菌苗切成0.5～1cm小段后，接入茎段愈伤诱导培养基中进行诱导培养29‑32d，以获得茎段愈伤组织，该茎段愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖38‑42g/L，琼脂5.8‑6.2g/L，6‑BA 0.48‑0.53mg/L，NAA 3.9‑4.2mg/L，pH＝5.75‑5.86；上述茎段愈伤组织诱导培养的条件为：光照强度为1200‑2000LuX，光照时间8‑12h/d，温度为25±2℃。