[发明专利]一种使用Namocell单细胞分离仪进行单细胞分选的方法在审
| 申请号： | 201811382652.0 | 申请日： | 2018-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN109554333A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 李琴;张肖肖;张朗;董慧芳;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 郑权 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区自由*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开一种单细胞分选的方法，包括以下步骤：1)样本准备：将待分选的CHO‑K1细胞用传代培养基稀释至1E5cells/mL的活细胞密度，加入钙黄绿素试剂染色；染色完成后，使用传代培养基将细胞稀释至5000cells/mL；2)样品加载：启动Namocell单细胞分离仪，将细胞注入到芯片腔体中，然后加载待检测芯片，3)位置校准：调整激光光斑至微流体通道中心位置；4)单细胞分选参数设置：设置荧光值为：FITCH＝500，FITCL＝30，PEH＝3，PEL＝0；5)单细胞分选：开始分选单细胞，通过高速电子阀门精确捕获活性细胞，并最终形成1μL体积的液滴，分选至孔板中，每孔分选1个细胞。本发明的方法能使提高单细胞分选效率以及单克隆的恢复率，相比现有技术中的CHO‑K1细胞其他分选和培养条件有显著的进步。 | ||
| 搜索关键词： | 分选 传代 单细胞分离 培养基 细胞 加载 微流体通道 参数设置 钙黄绿素 高速电子 活性细胞 激光光斑 检测芯片 培养条件 试剂染色 位置校准 细胞稀释 细胞注入 样本准备 恢复率 活细胞 芯片腔 染色 荧光 阀门 孔板 稀释 液滴 捕获 | ||
【主权项】：
1.一种单细胞分选的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)样本准备：将待分选的CHO‑K1细胞用传代培养基稀释至1E5cells/mL的活细胞密度，加入钙黄绿素试剂至钙黄绿素终浓度为10nM，将细胞染色5分钟；染色完成后，使用传代培养基将细胞稀释至5000cells/mL，用于单细胞分选；2)样品加载：启动Namocell单细胞分离仪，将步骤1)获得的细胞注入到芯片腔体中，然后加载待检测芯片，孔板托盘移动至芯片正下方来接受从喷嘴出来的液滴；3)位置校准：调整激光光斑至微流体通道中心位置；4)单细胞分选参数设置：设置荧光值为：FITCH＝500，FITCL＝30，PEH＝3，PEL＝0；5)单细胞分选：开始分选单细胞，单细胞流在微流控通道中流过激光检测区域，对细胞进行识别，通过高速电子阀门精确捕获活性细胞，并最终形成1μL体积的液滴，分选至孔板中，每孔分选1个细胞。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海药明生物技术有限公司，未经上海药明生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811382652.0/，转载请声明来源钻瓜专利网。
