[发明专利]一种条件性诱导表达AsCpf1慢病毒载体及其构建方法和在猪小肠上皮细胞建系中的应用在审
| 申请号： | 201811405578.X | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN109554394A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 白银山;朱翠;温婕妤;罗雁飞;潘淳烨;王丙云 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66;C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谢泳祥 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种条件性诱导表达AsCpf1慢病毒载体的构建方法，本发明还公开了用该种慢病毒载体包装所获得的Tet‑on‑3G‑pLVX‑AsCpf1慢病毒及其在猪小肠上皮细胞建系中的应用。猪小肠上皮细胞是研究肠道营养及其免疫等方面应用较广的一种细胞材料，本发明利用Tet‑on‑3G系统调控AsCpf1表达的慢病毒系统筛选出诱导表达的稳转猪小肠上皮细胞系，当添加Dox诱导时，24h内细胞就启动了大量AsCpf1表达，无Dox诱导时无AsCpf1表达；当停止添加Dox时，AsCpf1在12h后显著下降，在停止添加Dox 24h和48h时AsCpf1表达水平极低，72h后观察不到表达。 | ||
| 搜索关键词： | 猪小肠上皮细胞 慢病毒载体 诱导表达 慢病毒 条件性 构建 诱导 应用 上皮细胞系 表达水平 肠道营养 系统筛选 细胞材料 猪小肠 细胞 调控 观察 研究 | ||
【主权项】：
1.一种条件性诱导表达AsCpf1慢病毒载体的构建方法，其特征在于包括步骤：1)双酶切pCW‑Cas9载体，得到长度为7595bp的线性化Tet‑on‑3G慢病毒载体片段；2)利用引物1和引物2，以pLVX‑AsCpf1质粒为模板扩增AsCpf1基因，得到长度为4026bp的AsCpf1基因片段，所述引物1和引物2的序列如SEQ ID NO1和2所示；3)通过连接酶将步骤2)所得AsCpf1基因片段与步骤1)中Tet‑on‑3G慢病毒载体片段连接，即构建获得长度为11585bp的Tet‑on‑3G‑pLVX‑AsCpf1慢病毒载体。
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