[发明专利]一种延长烟用浆果类提取物货架期的抗菌剂筛选方法在审
申请号: | 201811420827.2 | 申请日: | 2018-11-27 |
公开(公告)号: | CN109517874A | 公开(公告)日: | 2019-03-26 |
发明(设计)人: | 彭建;蹇顺华;李星;张敦铁;程书锋 | 申请(专利权)人: | 湖北中烟工业有限责任公司 |
主分类号: | C12Q1/04 | 分类号: | C12Q1/04;C12Q1/18 |
代理公司: | 武汉楚天专利事务所 42113 | 代理人: | 杨宣仙 |
地址: | 430040 湖北省*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明提供了一种延长烟用浆果类提取物货架期的抗菌剂筛选方法。该方法从胀气浑浊烟用浆果类提取物中分离出污染微生物,经过涂片和1%蕃红染色后再进行显微镜观察,根据菌落形态和显微特征判断污染微生物种类;并在显微镜检的基础上,通过Biolog微生物自动分析系统鉴定污染微生物种名和属名;筛选适用于靶向微生物的抗菌剂,并采用96孔平板测定抗菌剂的最小抑菌浓度。选取对污染微生物有显著作用效果的抗菌剂,另外以未添加抗菌剂浆果类提取物作为对照,置于高温曝晒的环境下贮存6个月,贮存结束后观察发现,添加了抗菌剂的浆果类提取物未出现浑浊、胀气和气味的变化,测定活菌数明显降低,解决了浆果类提取物贮存周期短,产品质量不稳定的问题。 | ||
搜索关键词: | 抗菌剂 浆果 提取物 污染微生物 烟用 贮存 货架期 筛选 胀气 浑浊 微生物 自动分析系统 显微镜观察 菌落形态 显微镜检 显微特征 最小抑菌 活菌数 曝晒 染色 靶向 涂片 观察 发现 | ||
【主权项】:
1.一种延长烟用浆果类提取物货架期的抗菌剂筛选方法,其特征在于具体包括以下步骤:(1)污染微生物培养和分离:称取1g烟用浆果类提取物污染样品加入99mL无菌生理盐水中,置于摇床上150r/min震荡10~15min,然后将悬浮液用无菌生理盐水稀释到10‑7~10‑5,并取出100μL均匀涂布在Waksman培养基上,将培养物放入30℃恒温培养箱内培养20~25h;(2)污染微生物鉴定:将步骤(1)中培养好的污染微生物用接种环挑取单菌落,经过涂片和1%蕃红染色后再进行显微镜观察,根据菌落形态和显微特征判断污染微生物种类;并在显微镜检的基础上,通过Biolog微生物自动分析系统鉴定污染微生物种名和属名;(3)抑菌试验:根据步骤(2)中判断的污染微生物种类,每个种类选用多种食品级抗菌剂,用灭菌吐温80溶液配制成体积分数为1%的母液,然后采用7次二倍稀释法形成不同梯度浓度的抗菌液;用灭菌接种环挑取步骤(1)中培养好的污染微生物单个菌落,分别接种于Waksman液体培养基30℃恒温培养箱中培养2~4h,然后采用可见分光光度法测定菌悬液浓度,OD600nm在0.4~0.5时备用;用移液器在96孔板中分别加入0.9ml的Waksman液体培养基,按照不同梯度浓度分别加入0.1ml抗菌液,以加入0.1ml的吐温80溶液为阳性对照,混合均匀后接种20μL菌悬液,将孔板置于30℃,100rpm条件下培养24h,观察抑菌效果,选择出对每种污染微生物抑菌效果最显著的抗菌剂;当步骤(2)中的测定的污染微生物种类为一种时,其选择出来的抗菌剂即为该烟用浆果类提取物的抗菌剂;当步骤(2)中测定的污染微生物种类等于或大于两种时,将两种或两种以上的抗菌剂进行复配得到该烟用浆果类提取物的抗菌剂;(4)最低抑菌浓度的测定:把步骤(3)中抑菌试验中7个稀释浓度和对照进行编号,依次为X1、X2……X8,将样品摇匀后在吸收波长600nm处用可见分光光度计测定光密度值,当Xn‑Xn‑1/Xn取最大值时,Xn‑1对应的浓度为该抑菌剂的最低抑菌浓度即该抗菌剂的最小添加量。
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