[发明专利]一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法

摘要

本发明涉及一种细胞培养技术领域，尤指一种NK细胞和γδT细胞能够体外共同扩增培养的一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法，主要包括：S1、试剂选择；S2、通过培养基对PBMC培养，时间为3天；S3、增补培养基，维持浓度并培养4天；S4、第7天后离心弃上清然后转至T25细胞培养瓶中，后更换EX培养基；S5、第10天后增补培养基维持浓度；S6、第12天后继续增补培养基维持浓度；S7、第14天后检测NK及γδT细胞比例及细胞总数；本发明的共培养建立方法，一次性的培养出两种具有类似性质的抗肿瘤免疫细胞，提高细胞培养效率，相较于独立独立培养各种免疫细胞获得ＮＫ细胞和γδT细胞而言可大幅度降低培养成本，也降低了培养技术难度。

主权项

1.一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法，其特征在于，所述的建立方法包括：S1、试剂准备包括：IL2细胞因子、AlyS505NK‑AC培养基、EX培养基、HMBPP抗原、CD3抗体、CD56抗体、γ9抗体和PBMC外周血单个核细胞；S2、选用12孔板，将每毫升1.5×106个PBMC外周血单个核细胞的细胞放置于孔板内；依次加入无血清AC培养基激活、IL2细胞因子和HMBPP抗原；培养观察3天；S3、第3天，在12孔板中增补2mL无血清AC培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原，使得最终浓度与原始浓度相同，总体积为3mL，然后培养箱中培养4天；S4、第7天后，对细胞进行500g速度离心，离心5min后弃上清，然后将12孔板中的细胞分别转至T25细胞培养瓶中，再然后，更换5mL EX培养基进行扩增培养：依次加入无血清EX培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原；S5、第10天后，在T25细胞培养瓶中增补5mL无血清EX培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原，使得最终浓度与原始浓度一致，总体积为10mL；S6、第12天后，继续增补10 mL无血清EX培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原，使得最终浓度与原始浓度一致，总体积为20mL；S7、第14天后，检测NK及γδT细胞比例及细胞总数。