[发明专利]猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法在审

专利信息
申请号: 201811465138.3 申请日: 2018-12-03
公开(公告)号: CN109628374A 公开(公告)日: 2019-04-16
发明(设计)人: 吴月燕;吴燕燕;章辰飞;俞超 申请(专利权)人: 浙江万里学院
主分类号: C12N5/04 分类号: C12N5/04
代理公司: 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙) 33228 代理人: 周民乐
地址: 315100*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明提供猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法,步骤包括:(1)培养愈伤组织,培养基为以MS为基础培养基,添加6‑BA,NAA,蔗糖和琼脂,并调节pH为5.7‑5.8,培养温度为23‑26℃,光照强度为1000‑1500lx,光照时间为16h/d;(2)对愈伤组织用0.3‑0.7mol·L‑1甘露醇进行预处理,预处理时间为0<t≤90min;(3)再将愈伤组织放入酶解液进行酶解;(4)将酶解所得的混合液过滤,收集滤液并离心;取沉淀重悬,再次离心并弃去上清液,对沉淀洗涤即得原生质体。通过对愈伤组织培养条件的调整得到适宜的愈伤组织,此外通过甘露醇对愈伤组织进行预处理,提高原生质体的分裂频率,进而使原生质体的活力和产量都有所提高,本发明通过酶的种类、浓度、酶解时间、温度、pH、渗透剂等的配合,使特定愈伤组织得到的原生质体数量最多,且活力良好。
搜索关键词: 愈伤组织 原生质体 预处理 酶解 原生质体制 甘露醇 猕猴桃 光照 基础培养基 沉淀洗涤 培养条件 培养基 混合液 酶解液 上清液 渗透剂 蔗糖 放入 琼脂 重悬 沉淀 过滤 分裂 配合
【主权项】:
1.猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)培养愈伤组织,培养基为以MS为基础培养基,添加0.5‑1.5mg/L 6‑BA,0.05‑0.5mg/L NAA,25‑35g/L蔗糖和5‑9g/L琼脂,并调节pH为5.7‑5.8,培养温度为23‑26℃,光照强度为1000‑1500lx,光照时间为16h/d;(2)对步骤(1)所得的愈伤组织用0.3‑0.7mol·L‑1甘露醇进行预处理,预处理时间为0<t≤90min;(3)将步骤(2)所得的愈伤组织放入酶解液进行酶解;(4)将酶解所得的混合液过滤,收集滤液并离心;取沉淀重悬,再次离心并弃去上清液,对沉淀洗涤即得原生质体。
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