[发明专利]一种重组人IL-21蛋白及其制备和应用有效
| 申请号： | 201811488143.6 | 申请日： | 2018-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN109369797B | 公开（公告）日： | 2020-02-14 |
| 发明（设计）人： | 陆前进;吴海竞;龙笛;陈勇健;赵明 | 申请（专利权）人： | 中南大学湘雅二医院 |
| 主分类号： | C07K14/54 | 分类号： | C07K14/54;C12N15/85;C12N5/078 |
| 代理公司： | 43114 长沙市融智专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410011 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种重组人IL‑21蛋白及其制备和应用。将人IL‑21碱基序列进行优化，删去非编码序列及编码序列上的分泌肽段，将IL‑21编码序列与真核表达载体连接进行表达。本发明采用人源的HEK293F人胚肾细胞作为宿主细胞进行蛋白表达，并创新性的采用悬浮培养及转染，提高重组蛋白表达效率。表达的重组蛋白折叠及翻译后修饰都与生理蛋白极其相似，最大程度的保持人IL‑21蛋白的空间结构和生理功能。该IL‑21蛋白具有高纯度、高免疫原性，与商品化IL‑21蛋白相比，具有更强的刺激Tfh细胞分化的能力。可用于免疫治疗和诊断，研究免疫细胞等方面。同时本发明创新性的发现细胞因子IL‑21对外泌体的分泌具有重要作用，可作为外泌体及抗肿瘤研究的新方向。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白 制备和应用 编码序列 创新性 空间结构 真核表达载体 重组蛋白表达 翻译后修饰 非编码序列 高免疫原性 人胚肾细胞 蛋白表达 碱基序列 免疫细胞 免疫治疗 生理功能 宿主细胞 细胞分化 细胞因子 悬浮培养 重组蛋白 分泌肽 高纯度 抗肿瘤 新方向 折叠 可用 人源 转染 分泌 商品化 诊断 刺激 研究 优化 发现 | ||
【主权项】：
1.一种重组人IL-21蛋白的制备方法，其特征在于，提取Tfh细胞的总mRNA并逆转录为cDNA作为PCR扩增模板，设计引物扩增人IL-21基因，引入酶切位点；对载体质粒及目的片段双酶切，经连接酶构建重组质粒；构建成功的重组质粒转染入HEK293F细胞，之后大批量悬浮培养HEK293F细胞，收集培养基上清内蛋白进行纯化获得重组人IL-21蛋白；所述的重组人IL-21蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。/n
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