[发明专利]检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法

摘要

本发明公开了一种检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法，根据PCR扩增时引物和模板精确互补时扩增效率大幅增加的特性，设计3’末端碱基和待测位点野生型碱基互补匹配的引物，同时设计3’末端碱基和待测位点突变型碱基互补的引物，分别进入体系进行扩增，只有特异的引物会特异特定模板，通过高保真DNA聚合酶的扩增，体系中自带的荧光物质与扩增后的产物结合发出荧光，通过Real‑Time PCR仪器直接判断模板是野生型或者突变型。本方法简单高效，无需碱基测序，也不需要进行凝胶电泳，极大提高了准确性，减少了操作步骤，大大节省检验时间。

主权项

1.一种检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法，其特征在于：制得检测Y204C、R243Q、Y356X和R413P四个位点的四组引物，其中，Y204C突变位点的引物碱基序列为：野生型引物F1：5’‑CCTTGTATAAAACCCATGCTTGCTA‑3’；突变型引物F2：5’‑CCTTGTATAAAACCCATGCTTGCTG‑3’；共同下游引物R：5’‑CCATTGACCCTGATGTGGACT‑3’；R243Q突变点位的引物碱基序列为：野生型引物F1：5’‑ACTGGTTTCCGCCTCCG‑3’；突变型引物F2：5’‑ACTGGTTTCCGCCTCCA‑3’；共同下游引物R：5’‑TACTCACGGTTCGGGGGTAT‑3’；Y356X突变点位的引物碱基序列为：野生型引物F1：5’‑TTTCACTTGGGGCCTACAGTAC‑3’；突变型引物F2：5’‑TTTCACTTGGGGCCTACAGTAA‑3’；共同下游引物R：5’‑AGCTAGTGGCTCACCTTTGTC‑3’；R413P突变点位的引物碱基序列为：野生型引物F1：5’‑TCGGCCCTTCTCAGTTCG‑3’；突变型引物F2：5’‑TCGGCCCTTCTCAGTTCC‑3’；共同下游引物R：5’‑AAACCGAGTGGCCTCGTAAG‑3’；针对上述各个突变位点，将待检测的样本DNA分别采用对应的引物进行realtime‑PCR扩增并获取荧光数据，以判断各位点的情况。