[发明专利]一种分段调控的连续培养菌种的方法

摘要

本发明公开了一种分段调控的连续培养菌种的方法。本发明通过向发酵液中连续补加营养物质以维持菌体代谢，同时连续导出发酵液，进入串联发酵罐进一步发酵；为提高菌体代谢速率，在不同阶段分别调控溶氧、pH、补料组成等参数。本发明减少了菌种培养和设备清洗次数，有利于简化生产工艺并降低发酵成本。此外，通过分段调控连续发酵工艺，本发明提高了鼠李糖脂产量和发酵生产效率，产品批次稳定性得到提高，易应用于工业化生产。

主权项

1.一种分段调控的连续培养菌种的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配置发酵培养基并灭菌，发酵培养基至少含有一种碳源、一种氮源、一种磷源、一种镁源、一种钾源、一种钠源；将菌种经过活化、种子培养后加入装有发酵培养基的串联的1#、2#、3#发酵罐中，控制发酵液pH 6‑9，优选pH为7‑8，温度28‑40℃，优选温度为30‑35℃，发酵液通气量为1.0‑2.0vvm，搅拌转速在300‑600rpm之间，进行I阶段发酵；(2)发酵一定时间，当发酵液中菌体生长达到稳定期后，I阶段结束，开始连续向1#发酵罐中补加新鲜的补料培养基，并连续导出发酵液，进入2#发酵罐，同时导出2#发酵罐的发酵液进入3#发酵罐；控制各发酵罐补加和导出发酵液的速率，使罐内液体总体积基本不变；(3)在上述连续向1#发酵罐补加新鲜的补料培养基后的10‑30h内作为II阶段发酵，提高1#发酵罐发酵液通气量至2.0‑3.0vvm，搅拌转速提高至500‑700rpm，补料培养基中碳源浓度提高至发酵培养基的1.2‑1.8倍；在随后的20‑50h内进行III阶段发酵，发酵液通气量和搅拌转速分别降低为0.5‑1.5vvm和300‑500rpm，补料培养基中碳源浓度降至发酵培养基的0.4‑0.7倍；随后重复上述过程，进行连续发酵；(4)从1#发酵罐连续导出发酵液进入2#发酵罐后，2#发酵罐进行IV阶段的中段发酵过程，控制2#发酵罐发酵液pH 6‑9，优选pH为7‑8，温度28‑40℃，优选温度为30‑35℃，通气量2.0‑3.0vvm，搅拌转速在300‑600rpm，此过程不补加新鲜培养基；(5)导出2#发酵罐的发酵液进入3#发酵罐后，3#发酵罐进行V阶段的后段发酵过程，控制3#发酵罐发酵液pH 6‑9，优选pH为7‑8，温度28‑40℃，优选温度为30‑35℃，通气量1.0‑2.0vvm，搅拌转速在300‑600rpm，发酵过程中持续导出发酵液。