[发明专利]条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系构建方法及应用在审
| 申请号： | 201811541828.2 | 申请日： | 2018-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN109666648A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 朱翠;白银山;陈庄;蒋宗勇;叶金玲;陈子韬 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;C12N15/65 |
| 代理公司： | 广州文智专利代理事务所(特殊普通合伙) 44469 | 代理人： | 刘敏 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明具体涉及一种条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系构建方法及应用。所述条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系及其构建方法，包括：分别以pLX‑sgRNA‑EGFP载体为模板，扩增得到hU6和Aqp11靶向sgRNA序列；以hU6和Aqp11靶向sgRNA序列为模板，SEQIDNo:3和SEQIDNo:6为引物进行重叠PCR扩增，得到hU6‑Aqp11‑sgRNA片段；XhoI和NheI两个酶双酶切pLX‑sgRNA‑EGFP载体和hU6‑Aqp11‑sgRNA片段，得到pLX‑sgRNA‑EGFP载体骨架和hU6‑Aqp11‑sgRNA粘性末端片段，连接、转化，构建得到pLX‑Aqp11‑sgRNA‑EGFP质粒；pLX‑Aqp11‑sgRNA‑EGFP质粒进行纯化、包装得到携带靶向Aqp11‑sgRNA‑EGFP的慢病毒，利用该慢病毒侵染条件性表达Cas9的猪滋养层细胞系，即构建得到所述条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系。 | ||
| 搜索关键词： | 滋养层细胞 基因敲除 条件性 诱导 靶向 构建 细胞系构建 慢病毒 扩增 质粒 条件性表达 载体骨架 粘性末端 重叠PCR 双酶切 滋养层 侵染 引物 应用 携带 转化 | ||
【主权项】：
1.一种条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系构建方法，其特征在于，包括：分别以pLX‑sgRNA‑EGFP载体为模板，SEQIDNo:3~4和SEQIDNo:5~6为引物，扩增得到hU6和Aqp11靶向sgRNA序列；以hU6和Aqp11靶向sgRNA序列为模板，SEQIDNo:3和SEQIDNo:6为引物进行重叠PCR扩增，得到hU6‑Aqp11‑sgRNA片段；XhoI和NheI两个酶双酶切pLX‑sgRNA‑EGFP载体和hU6‑Aqp11‑sgRNA片段，得到pLX‑sgRNA‑EGFP载体骨架和hU6‑Aqp11‑sgRNA粘性末端片段，连接、转化，构建得到pLX‑Aqp11‑sgRNA‑EGFP质粒；pLX‑Aqp11‑sgRNA‑EGFP质粒进行纯化、包装得到携带靶向Aqp11‑sgRNA‑EGFP的慢病毒，利用该慢病毒侵染条件性表达Cas9的猪滋养层细胞系，即构建得到所述条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系。
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