[发明专利]一种产单宁酶假丝酵母菌的筛选及其酶活性测定方法

摘要

本发明属菌株筛选鉴定技术领域，公开了一种产单宁酶假丝酵母菌的筛选及其酶活性测定方法，包括土样处理、菌株的分离纯化、摇瓶发酵并测其酶活性等，确定目的菌株；再通过打孔法和测量酶水解圈法进行菌种复筛。本发明通过摇瓶发酵、酶活性测定等一系列步骤，从土壤中分离纯化获得了1株酶活性较稳定的产单宁酶的菌株GL‑4；经分子生物学鉴定GL‑4菌属于假丝酵母菌，该菌株产酶酶活性为244.530U/mL。本发明的结果为产单宁酶微生物的分离筛选提供了实验依据，也为微生物源单宁酶生产奠定基础。通过正交试验，优化后其酶活性达到395.948U/mL，较优化前提高了61.9％。

主权项

1.一种产单宁酶假丝酵母菌的筛选方法，其特征在于，所述产单宁酶假丝酵母菌的筛选方法包括以下步骤：步骤一：土样处理，称量5.0g土样，置于装有45mL富集培养基的250mL三角瓶中，放入几颗小玻璃珠，在摇床中30℃、180r/min振荡富集培养24h；步骤二：菌株的分离纯化，选出酶活性较稳定的菌株，转接至斜面培养基培养3d，保存于4℃冰箱备用；步骤三：菌株摇瓶发酵并测其酶活性，纯化结束后将单菌落接种到富集培养液中培养18h，30℃、180r/min摇瓶培养72h并测定其酶活性，确定目的菌株；步骤四：采用打孔法进行菌株复筛，制备粗酶液，利用打孔器，孔径为7mm，在鉴别培养基上打孔，将20μL粗酶液加入孔内，培养3d，看其降解圈的直径大小，进行产酶量的初步鉴定。