[发明专利]一种采用金色分枝杆菌制备孕烯醇酮的方法

摘要

本发明涉及孕烯醇酮制备技术领域，公开了一种采用金色分枝杆菌制备孕烯醇酮的方法，步骤为，S1：取保存好的金色分支杆菌接种在PDA平板上，30℃下培养3d，待金色分支杆菌长满平板后，将无菌Tritonx‑1000.1％5mL注入平板，轻摇使金色分支杆菌孢子均匀分散取，将悬浮液接种于沙仕固体培养基中，于30℃恒温培养36h；S2：将步骤S1中培养36h后的金色分支杆菌平板置于无菌紫外灯下照射处理，照射强度为285.8W/c㎡，照射时间为5‑15min，然后将处理过的平板在光照下30℃培养36h，取出样本；S3：将步骤S2中培养后的产生样本放入培养基中，在30℃的温度下，培养45h。该采用金色分枝杆菌制备孕烯醇酮的方法，能够解决目前生产方法效率低，成本较高，不能满足生产需求的问题。

主权项

1.一种采用金色分枝杆菌制备孕烯醇酮的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：取保存好的金色分支杆菌接种在PDA平板上，30℃下培养3d，待金色分支杆菌长满平板后，将5mL无菌0.1mol/L的Tritonx‑100注入平板，轻摇使金色分支杆菌孢子均匀分散取，于30℃恒温培养36h；S2：将步骤S1中培养36h后的金色分支杆菌平板置于无菌紫外灯下照射处理，照射强度为285.8W/c㎡，照射时间为5‑15min，然后将处理过的平板在光照下30℃培养36h，取出样本；S3：将步骤S2中培养后的产生样本放入培养基A中，在30℃的温度下，培养45h，所述的培养基A通过牛肉浸膏0.4g、氨基酸1.2g和无机盐0.5g混合搅拌5min，再加入琼脂2g搅拌2min，静置10min所制备；S4：将步骤S3中所得到菌株作为出发菌株，采用常压温室等离子(ARTP)诱变技术对出发菌株的单细胞悬浮液进行诱变处理，然后依据H+依赖型脱氧酶缺失型方法进行初步筛选，通过摇瓶进行复筛得到变异金色分支杆菌；S5：将步骤S4中所得到变异金色分支杆菌进行去核处理，将全基因合成的DNA生物酶基因片段孕烯醇酮提取到去核的变异金色分支杆菌中，构建产孕烯醇酮的金色分支杆菌；S6：将步骤S5中所得到的金色分支杆菌置于培养基B中，在光照环境下30℃培养36h，对金色分支杆菌进行加工，洗出孕烯醇酮与粗产物,所述的培养基B通过牛肉膏3g，蛋白胨10g，无机盐5g，葡萄糖15g，琼脂16g，加水1L,混合搅拌均匀，静置10min所制备。