[发明专利]一种基因编辑方法在东方拟无枝酸菌中的应用在审
| 申请号： | 201811552697.8 | 申请日： | 2018-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN109609537A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 倪瑶;魏维;钱秀萍;夏兴;戈梅 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学;上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/90;C12N15/65;C12N15/54;C12N1/21;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海华工专利事务所(普通合伙) 31104 | 代理人： | 缪利明;赵孟琴 |
| 地址： | 200030 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9编辑系统在东方拟无枝酸菌中进行基因敲除与敲入的方法，该方法将CRISPR/Cas9编辑质粒pLYNY04引入东方拟无枝酸菌Amycolatopsis orientalis HCCB10007中，同时实现了基因敲除与敲入，可以简化遗传操作，提高东方拟无枝酸菌的整合效率。本发明还公开了一种含有gtfD基因同源臂的CRISPR/Cas9编辑质粒pLYNY04，将eGFP插入东方拟无枝酸菌的靶标序列，以便于检测基因编辑结果。本发明还公开了一种含有gtfD基因同源臂的CRISPR/Cas9编辑质粒pLYNY04的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 东方拟无枝酸菌 质粒 基因 基因敲除 同源臂 编辑结果 编辑系统 遗传操作 靶标 整合 应用 引入 检测 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR/Cas9编辑系统在东方拟无枝酸菌中进行基因敲除与敲入的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、构建含有Cas9和sgRNA的骨架质粒pKCpGcas9EgdgtfD‑NA；步骤二、构建含有eGFP的靶标序列同源臂；步骤三、含有gtfD基因同源臂的编辑质粒pLYNY04的构建将步骤一的骨架质粒pKCpGcas9EgdgtfD‑NA使用限制性内切酶进行线性化；接着，使用同源重组试剂盒将步骤二的带有eGFP的靶标序列同源臂整合到线性化的pKCpGcas9EgdgtfD‑NA中，获得含有gtfD基因同源臂的编辑质粒pLYNY04；步骤四、将编辑质粒pLYNY04电转化入A.orientalis HCCB10007将步骤三得到的含有gtfD基因同源臂的编辑质粒pLYNY04电转入感受态A.orientalis HCCB10007细胞，同时实现eGFP的敲入以及定点靶标序列的敲除。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学;上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司，未经上海交通大学;上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811552697.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
