[发明专利]一种南方水稻黑条矮缩病毒P6蛋白的原核表达、多克隆抗体的制备及应用

摘要

本发明公开了一种南方水稻黑条矮缩病毒P6蛋白的原核表达、多克隆抗体的制备方法，该方法包括提取南方水稻黑条矮缩病毒的RNA、反转录cDNA、设计引物扩增其P6外壳蛋白、构建重组质粒、大肠杆菌原核表达、免疫接种、制备多克隆抗体等步骤。本发明还公开了一种所述南方水稻黑条矮缩病毒P6蛋白多克隆抗体在检测植物组织SRBSDV病毒含量的应用。本发明多克隆抗体具有检测结果可靠，可对水稻不同组织中的病毒含量进行定量检测，从而为南方水稻黑条矮缩病的预测预警及科学防控提供技术支持和理论支撑。

主权项

1.一种南方水稻黑条矮缩病毒P6蛋白的原核表达方法，包括以下步骤：(1)提取南方水稻黑条矮缩病毒的RNA；(2)将RNA反转录为cDNA；(3)以cDNA为模板扩增SRBSDV的P6外壳蛋白基因，得P6外壳蛋白基因的扩增产物与原核表达载体pET‑28a；(4)构建重组原核表达质粒pET‑28a‑P6对P6外壳蛋白基因的扩增产物与原核表达载体pET‑28a分别进行酶切，回收酶切产物，并将酶切产物进行连接，连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，筛选、鉴定，获得构建正确的重组质粒pET‑28a‑P6；(5)P6蛋白的表达和纯化将重组质粒pET‑28a‑P6转化大肠杆菌细胞，筛选阳性克隆，诱导培养，裂解细胞，离心收集沉淀，洗涤得粗提蛋白，再经蛋白纯化系统纯化和脱盐，得到纯化后的蛋白。