[发明专利]一种培养高纯度贵州香猪原代睾丸间质细胞的方法在审
| 申请号： | 201811571362.0 | 申请日： | 2018-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN109439615A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 龚婷;王维勇;袁超;朱晓锋;徐永健;蒙利洁;宋林锦 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 贵阳东圣专利商标事务有限公司 52002 | 代理人： | 兰艳文 |
| 地址： | 550025 贵州省*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种培养高纯度贵州香猪原代睾丸间质细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）用胶原酶消化香猪睾丸组织块以获得细胞悬浮液：（2）0.25%Trypsin‑EDTA重复消化获得睾丸间质细胞；（3）差速离心法富集睾丸间质细胞：差速离心法至少包括3次离心，第一次800rpm‑1200rpm，时间3‑8min,第二次和第三次为600rpm‑1000rpm，时间为3‑8min；（4）差速贴壁法纯化睾丸间质细胞。本发明与现有的猪睾丸间质细胞原代培养及纯化方法相比，其操作更为简单高效，并且获得了数量多、活性强、纯度高的贵州香猪睾丸间质细胞。本发明可为深入研究贵州香猪性早熟性状及睾丸间质细胞相关功能提供有效的技术指导。 | ||
| 搜索关键词： | 睾丸间质细胞 香猪 差速离心 高纯度 差速贴壁法 胶原酶消化 细胞悬浮液 功能提供 技术指导 间质细胞 原代培养 睾丸组织 性早熟 猪睾丸 富集 性状 消化 重复 研究 | ||
【主权项】：
1.一种培养高纯度贵州香猪原代睾丸间质细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）用胶原酶消化香猪睾丸组织块以获得细胞悬浮液：胶原酶选择I型胶原酶或II型胶原酶或IV型胶原酶；胶原酶浓度为0.03%‑0.3%之间；胶原酶消化液与睾丸组织之间体积比为3：1到8：1；胶原酶消化时间为15min‑60min；（2）0.25%Trypsin‑EDTA重复消化获得睾丸间质细胞；（3）差速离心法富集睾丸间质细胞：差速离心法至少包括3次离心，第一次800rpm‑1200rpm，时间3‑8min,第二次和第三次为600rpm‑1000rpm，时间为3‑8min；（4）差速贴壁法纯化睾丸间质细胞：差速贴壁法培养包括两次细胞培养，其中第一次持续时间4‑12h，第二次持续时间为12‑24h；第一次、第二次细胞培养条件均为37℃，5%CO2；第一、第二次所采用的培养基均为DMEM/F12，胎牛血清含量均为DMEM/F12培养基体积的10%，双抗含量均为DMEM/F12培养基体积的1%。
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