[发明专利]一种快速检测花生过敏原蛋白Ara h2的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测花生过敏原蛋白Arah2的方法，本发明将包裹在磁珠/金纳米颗粒/海藻酸盐/氧化石墨烯复合水凝胶中的大鼠嗜碱性白血病（RBL‑2H3）肥大细胞固定在玻碳电极上构建肥大细胞传感器，通过对过敏原蛋白Arah2刺激下肥大细胞的反应进行电化学分析，使用电化学阻抗谱记录和测定过敏原蛋白Ara h2的含量。所开发的细胞传感器对Arah2浓度范围在0.02到0.1ng/mL之间具有较高的检测精度，检测限为8pg/mL。本方法与市售ELISA试剂盒相比检测结果相一致，证明本发明提出的用于检测花生过敏原的方法简单易操作，灵敏度高且检测结果准确可靠，具有十分广阔的应用前景。

主权项

1.一种细胞传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）、混合凝胶的制备：将氧化石墨烯与DMEM培养液按质量体积比为0.1g：100mL的比例混合，超声处理4‑6min，使得氧化石墨烯均匀地分散在DMEM培养液中得到氧化石墨烯混合液，然后向含有1%海藻酸钠的DMEM培养液中滴加占DMEM培养液质量分数为10%的氧化石墨烯混合液，制得海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶，之后向凝胶中添加纳米磁珠使得凝胶中的纳米磁珠的含量为1mg/mL，得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠凝胶，再向凝胶中添加纳米金粒子，使得凝胶中纳米金的含量为0.4mg/mL，得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠/纳米金混合凝胶；2）、肥大细胞RBL‑2H3的培养：在37℃、CO2含量为5％的培养环境中，于含有体积浓度为10％的胎牛血清的DMEM培养基中培养肥大细胞RBL‑2H3 2～3天，将肥大细胞与小鼠单克隆Ara h2 IgG1抗体孵育30min，之后收集细胞得到肥大细胞悬浮液；3）、细胞固定：将细胞悬浮液与混合凝胶按体积比1:1混合，混匀后吸取20μL滴加在电极的表面，然后浸没于CaCl2溶液中进行固定，固定6min，并置于5％CO2的37℃培养箱孵育5min，制备得到细胞传感器。